利用电喷雾质子化裂解‑质谱多反应检测模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用电喷雾质子化裂解‑质谱多反应检测模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法。三萜皂苷在含有甲酸或甲酸氨的流动相中形成稳定的[M+H]

【技术实现步骤摘要】
利用电喷雾质子化裂解-质谱多反应检测模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法
本专利技术涉及一种中药中三萜皂苷的定量方法，特别涉及一种基于电喷雾质子化裂解-质谱多反应检测模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法。本专利技术属于化学分析及检测

技术介绍
三萜皂苷作为中药中主要有效部位或有效部位群，已经被研究者广泛接受。然而，三萜皂苷分子缺少发色团、紫外为末端吸收、不具挥发性的特点，因此目前缺少行之有效的三萜皂苷定量方法。现阶段中药三萜皂苷的定量方法，主要采用高效液相色谱-紫外光谱法、高效液相色谱-蒸发光检测法和高效液相色谱-电喷雾-串联质谱法等。虽然液相色谱-电喷雾串联质谱法(LC-MS/MS-MRM)已用于中药三萜皂苷的定量研究，但主要选择[M+Na]+和[M-H]-做为母离子，且优化方式主要采用注射泵优化去簇电压(DP)、碰撞能(CE)和碰撞室射出电压(CXP)等主要质谱参数，获得相应参数最优值。虽然采用电喷雾串联质谱法通过MRM模式，碎裂[M+Na]+和[M-H]-母离子对中药中常量三萜皂苷能达到满意定量结果，然而该方法在检测部分中药皂苷时检测灵敏度较低，而且定量困难。
技术实现思路
本专利技术的目的在于运用液相色谱-串联四级杆质谱技术，采用电喷雾阳离子串联质谱检测模式(ESI+-MS/MS)，建立一种利用电喷雾质子化裂解-质谱多反应检测模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法。为了达到上述目的，本专利技术采用了以下技术手段：一种利用电喷雾质子化裂解-质谱多反应监测(MRM)模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法，包括以下步骤：三萜皂苷在含有甲酸或甲酸氨的流动相中形成稳定的[M+H]+和/或[M+NH4]+分子离子峰，运用液相色谱-串联四级杆质谱联用仪，采用电喷雾阳离子串联质谱检测模式(ESI+-MRM)，通过单因素实验法和响应面法，快速在线优化包括去簇电压(DP)以及碰撞能(CE)在内的质谱参数，使之形成高强度的中药三萜皂苷MRM靶向离子对，通过此系列特征性的MRM靶向离子对，达到对中药中三萜皂苷快速定性和定量分析的目的。中药三萜皂苷[M+NH4]+分子离子峰，易于中性损失NH3基团(17Da)，转化成[M+H]+分子离子峰。[M+H]+离子易于发生裂解，形成系列特征性的MRM靶向离子对，其中包括系列高强度的[苷元+H-nH2O]+(n＝0,1,2,....)碎片离子峰。出现多少苷元脱水碎片离子峰与三萜皂苷的分子量、含糖基的种类、含糖基的数量、糖基的连接方式和含糖链的数量等因素关系不大，但与苷元所含羟基基团的数量明显有关。在本专利技术所述的方法中，优选的，根据质子化裂解靶向离子对Q1/Q3的计算公式，即Q1＝[M+H]+或[M+NH4]+)和Q3＝[苷元+H-H2O]+或[苷元+H-2H2O]+)或[苷元+H-nH2O]+，其中n为大于或等于0的整数，分别预测得出中药三萜皂苷MRM系列特征性的靶向离子对。DP、CE和CXP是影响中药皂苷质子化裂解MRM离子对产生的重要因素，尤其是DP和CE值。因此，在本专利技术所述的方法中，优选的，还包括对碰撞室射出电压(CXP)质谱参数的优化。可通过单因素实验法和响应面法优化DP、CE和CXP等质谱参数，预测得出产生最大MRM靶向离子对响应值所需最优的DP、CE和CXP等质谱参数值。在本专利技术所述的方法中，在单因素实验的基础上，若考虑去簇电压(DP)以及碰撞能(CE)两个因素影响，优选使用Central-Compositedesign方法；若考虑去簇电压(DP)、碰撞能(CE)以及碰撞室射出电压(CXP)三个因素影响，优选使用Box-Behnkendesign方法。在本专利技术所述的方法中，优选的，所述的方法按照以下步骤进行：(1)建立MRM靶向离子采用质谱MRM检测模式，以皂苷标准品为模板化合物，通过响应面优化质子/氨化离子裂解MRM靶向离子对，根据质子化裂解靶向MRM离子对Q1/Q3的计算公式，Q1＝[M+H]+或[M+NH4]+)和Q3＝[苷元+H-H2O]+或[苷元+H-2H2O]+)或[苷元+H-nH2O]+，其中n为大于等于0的整数，提前预测得出中药三萜皂苷标准品的靶向离子对；(2)基于响应面法优化DP、CE和CXP等质谱参数用Central-Compositedesign方法优化两因素的DP和CE值，用Box–Behnkendesign方法优化三因素的DP、CE和CXP值；(3)标准品溶液的配制精密称取皂苷标准品，精密称定，加甲醇配制成把标准品储备液稀释成不同浓度的标准品溶液；于4℃保存备用；(4)运用液相色谱-串联四级杆质谱联用仪对标准品溶液以及样品溶液进行检测；(5)标准曲线的建立以不同浓度的皂苷标准品的峰面积为纵坐标，以皂苷标准品的浓度为横坐标进行线性回归分析，建立标准曲线；(6)样品溶液中皂苷的含量的计算样品溶液按照步骤(4)的方法进行测定，根据步骤(5)建立的标准曲线计算出样品溶液中皂苷的含量。在本专利技术所述的方法中，优选的，所述的样品为类叶牡丹或辽东楤木。优选的，当所述的样品为类叶牡丹时，其色谱检测条件以及质谱检测条件如下：色谱检测条件：色谱柱：HSST3(150mm×2.1mm,1.8μm)；保护柱：HSST3(2.1mm×5mm,1.8μm)；柱温35℃；样品室4℃；流速0.3mL/min；进样量2.0μL；样品池10℃；流动相A为0.1v/v％甲酸水溶液，流动相B为含0.1v/v％甲酸的乙腈溶液，洗脱梯度为：0-2min30％–31％B；2-4.1min31％–31％B；4.1-4.2min31％–35％B；4.2-12min35％–60％B；12-15min60％–65％B；质谱检测条件：正离子模式下工作，扫描方式为多反应检测模式(MRM)；喷射电压：5500V；离子源温度：400℃；雾化器：50psi；加热器：50psi；氮气用于碰撞器和辅助气体；打开接口加热器。优选的，当所述的样品为辽东楤木时，其色谱检测条件以及质谱检测条件如下：色谱检测条件：色谱柱：HSST3(150mmeoptimization；保护柱：HSST3(2.1mmeoptimization；色谱条件：柱温35℃；样品室4℃；流速0.3mL/min；进样量5.0μL；样品池温度10℃；流动相A为0.1v/v％甲酸水溶液，流动相B为0.1v/v％甲酸乙腈液，洗脱梯度为0-1.5min10％-35％B；1.5-7min35％-35％B；7-7.5min35％-50％B；7.5-11min50％-90％B；11-11.5min90％-10％B；11.51-15min10％-10％B。质谱检测条件：正离子模式下工作，扫描方式为多反映检测模式(MRM)；喷射电压：5500V；离子源温度：250℃；雾化器：50psi；加热器：50psi；氮气用于碰撞器和辅助气体；打开接口加热器。相较于现有技术，本专利技术的有益效果是：本专利技术公开一种基于电喷雾质子化裂解-质谱多反应监测的中药三萜皂苷定性、定量方法。该方法运用液相色谱-串联四级杆质谱技术，采用电喷雾阳离子串联质谱检测模式(ESI+-MRM)，利用中药三萜皂苷易于质子化裂解能够形成系列特征性的MRM离子对(Q1＝[M+H]+或[M+NH4本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用电喷雾质子化裂解‑质谱多反应监测(MRM)模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法，其特征在于，包括以下步骤：三萜皂苷在含有甲酸或甲酸氨的流动相中形成稳定的[M+H]

【技术特征摘要】
1.利用电喷雾质子化裂解-质谱多反应监测(MRM)模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法，其特征在于，包括以下步骤：三萜皂苷在含有甲酸或甲酸氨的流动相中形成稳定的[M+H]+和/或[M+NH4]+分子离子峰，运用液相色谱-串联四级杆质谱联用仪，采用电喷雾阳离子串联质谱检测模式(ESI+-MRM)，通过单因素实验法和响应面法，快速在线优化包括去簇电压(DP)以及碰撞能(CE)在内的质谱参数，使之形成高强度的中药三萜皂苷MRM靶向离子对，通过此系列特征性的MRM靶向离子对，达到对中药中三萜皂苷快速定性和定量分析的目的。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，根据质子化裂解靶向离子对Q1/Q3的计算公式，即Q1＝[M+H]+或[M+NH4]+)和Q3＝[苷元+H-H2O]+或[苷元+H-2H2O]+)或[苷元+H-nH2O]+，其中n为大于或等于0的整数，分别预测得出中药三萜皂苷MRM系列特征性的靶向离子对。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括对碰撞室射出电压(CXP)质谱参数的优化。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在单因素实验的基础上，若考虑去簇电压(DP)以及碰撞能(CE)两个主要因素的影响，优选使用Central-Compositedesign方法；若考虑去簇电压(DP)、碰撞能(CE)以及碰撞室射出电压(CXP)三个因素的影响，优选使用Box–Behnkendesign方法。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法按照以下步骤进行：(1)建立MRM靶向离子采用质谱MRM检测模式，以皂苷标准品为模板化合物，通过响应面优化质子/氨化离子裂解MRM靶向离子对，根据质子化裂解靶向MRM离子对Q1/Q3的计算公式，Q1＝[M+H]+或[M+NH4]+)和Q3＝[苷元+H-H2O]+或[苷元+H-2H2O]+)或[苷元+H-nH2O]+，其中n为大于等于0的整数，提前预测得出中药三萜皂苷标准品的靶向离子对；(2)基于响应面法优化DP、CE和CXP等质谱参数用Central-Compositedesign方法优化两因素的DP和CE值，用Box–Behnkendesign方法优化三因素的DP、CE和CXP值；(3)标准品溶液的配制精密称取皂苷标准品，精密称定，加甲醇配制成把标准品储备液稀释成不同浓度的标准品溶液；于4℃保存...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏永刚，梁军，匡海学，杨炳友，
申请(专利权)人：匡海学，夏永刚，杨炳友，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23