包含转基因植物材料的稳定组合物制造技术

一种包含作为有效成分的多肽的热变形处理的组合物，所说的组合物可以通过使包含转基因植物材料的原材料经受热变形处理获得，由于在所说植物材料中转基因的表达，所说的多肽已经在该植物材料中生物合成。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及在工业处理(如食品或饲料组合物的制造)中酶的应用。
技术介绍
在家畜饲养中应用酶已成为极平常的措施。这些酶在由工业酶生产者操作的大规模发酵罐中生长的微生物产生。发酵期的最后，微生物的肉汤常经历一系列过滤步骤以从酶中分离生物量。酶溶液或是在添加各种稳定剂之后作为液体或是处理成干制剂后出售。酶液和干制剂由饲料工业以商业规模利用。液体在造粒(pelleting)之后用于饲料以防止通过造粒处理引起的酶的热失活。问题是在最终饲料制剂中酶的数量十分小，这使实现酶分子在饲料中均质分布比较困难。液体明显地比干燥成分混合起来更困难。在造粒之后把液体加到饲料中需要特定的设备，而目前大多饲料制造厂中没有这些设备。另一方面，酶的干制剂有在造粒过程中酶热失活的缺点。在造粒过程中，饲料通过模具压缩，形成的条块切割成不同长度的合适的小丸。当进入造粒设备时团块的湿度通常在大约18％到大约19％之间。在造粒之后，立即把温度升高到60-95℃。高含水量和高温的结合影响对大多数酶有害。这些缺点在饲料的其它类型的热变形处理中(如挤压(extrusion)和膨胀(expansion))也同样存在。为了克服这些问题，有人发表了一种用于生产包含一种或多种酶的热稳定性酶预混物的方法，所说的酶在商业饲料造粒处理中保留了有效水平的活性(Haarakilta，A(1988)欧洲专利申请#0257996 B1)。所说方法包括的步骤如下把生理上可接受的并能吸收含水的酶溶液的谷物载体和含水的酶溶液混合一段时间，这一时间足以把一种或多种酶吸附在载体上以形成载体/酶复合物；造粒载体/酶复合物；然后把造粒的载体/酶复合物干燥到含水量在7％到15％之间，优选地是小于大约10％(重量比)。这种方法很费工，而且就我们所知没有产生提高的造粒抗性。各种酶制造厂商开发了不同的制剂方法以在饲料造粒和存储期间提高干酶产品的稳定性。已有人提出，例如，特征在于产品颗粒被涂上一层粒子的制剂会提高对造粒条件的抗性(WO 92/12645)。这些努力强调了这一问题的重要性和工业上对解决这一应用问题的需要。专利技术概述现在，我们令人惊奇地发现当酶以转基因植物材料的形式添加到饲料中时，酶对热变形处理(如造粒)更具抵抗力，在植物材料中这些酶通过转基因的表达产生。这样，本专利技术公开了包含作为有效成分的多肽的热变形处理的组合物，所说的组合物可以通过使包含转基因植物材料的原材料经受热变形处理获得，由于在所说植物材料中转基因的表达，所说的多肽已经在该植物材料中生物合成。优选的热变形处理是造粒、挤压和膨胀。本专利技术公开了这些组合物作为动物饲料或其预混物的用途。具体地说，在促进动物的生长的过程中，使用本专利技术的组合物，其中给动物饲喂包含这些组合物的饲料。本专利技术进一步公开了包含作为有效成分的多肽的热变形处理的组合物的制备方法。专利技术详述在本专利技术中应用的热变形处理经常在商业饲料处理中使用，其中处理方法以许多形式存在，如膨胀、挤压和造粒，或这些方法的结合。所有这些处理的特征在于热能(通常以蒸汽的形式)和机械能(例如，通过螺旋驱动饲料)的输入。在饲料生产中，造粒是经典的处理方法，它也可以如对任何原材料一样应用热变形处理。混合原材料，并在加上几巴的低压蒸汽之后把原材料转移到旋转模具上。模具通常包含几百个洞，产物通过洞。通过模具里的旋转滚筒挤压。挤压是一种用于饲料生产的替代方法，它可以如用于任何原材料一样用作热变形地处理。原材料放在通常由几个较小的模具的压力环组成的一个无底的螺丝上。此螺丝把产物推进模具中。温度升高是通过螺丝和外套之间的产物摩擦和压力增加造成的。挤压机的内部和外部的压力不同导致部分水在出口汽化，这样就使产物膨胀。膨胀是十分类似于挤压但不以限制的方式使材料成形的方法，因为它通常不通过模具。产生用于动物饲料中的酶的替代方法已通过在植物和植物种子中表达编码饲料酶(如微生物肌醇六磷酸酶)的基因专利技术出来(Pen等，EP-A-0 449375)。直接的或是在处理后植物或植物种子表达的这些酶的使用与动物饲料中的使用是协调的。本专利技术的转基因植物材料优选地包含一种或多种所需的多肽，这种多肽是包含在衍生植物材料的植物中的转基因的表达产物。这通过把包含编码所需的多肽的DNA序列的表达构建体导入植物来达到，其中多肽具有相应的活性，例如肌醇六磷酸酶(其中详尺的描述可在Pen等，EP-A-0 449 375中找到)。本文中的转基因植物和转基因植物材料定义为包括植物(以及所说植物的部分和细胞)及其后代，这些后代利用重组DNA技术遗传改良以在植物或植物器官中产生、增强或改变所需的多肽的产生。在本文中，转基因可理解为指在转基因植物中的特定的遗传修饰，即核苷酸序列。在本专利技术的组合物中，多肽用作活性成分，由此，活性成分被限定为由转基因编码的。在本专利技术中使用的多肽在转基因植物中可在所有组织、所有发育阶段组成性地产生。在某些情况下，如在植物细胞壁降解酶存在的情况下，可能需要限制转基因表达到植物的特定部分，在此部分中，表达的所需的多肽不干扰宿主植物的发育。因此，编码所需多肽的基因也可以以阶段和/或组织特异性的方式表达，或者可替代的是，可把这些基因置于可诱导的启动子的控制之下。在一个优选的实施方案中使用了完整的或磨碎(milling orgringing)之后的种子，其中所需的多肽使用种子特异性启动子特异性表达。然而，本领域技术人员知道多肽在其它植物器官中表达是同样切实可行的，而且如在本专利技术中公开的应用中可以产生类似的优点。植物物种的选择主要由植物或其部分的预期的用途和对转化的适应性确定。在本专利技术内，所选择的植物包括(但不限于)以下作物生产可食用花的作物，如花椰菜类(如甘蓝)、朝鲜蓟(洋蓟)，生产水果的作物，如苹果类(苹果属，例如Malus domesticus)、香蕉类(芭蕉属，例如，小果野蕉)、浆果类(如葡萄干，茶镳子属，例如，红醋栗)、樱桃类(如甜樱桃，梅，例如，欧洲甜樱桃)、黄瓜类(黄瓜属，例如，黄瓜)、葡萄类(葡萄属，例如，葡萄)、柠檬类(柠檬)、甜瓜类(甜瓜)、坚果类(如核桃，核桃属，例如，核桃；花生，落花生)、桔子类(柑桔属，例如，Citrus maxima)、桃类(梅属，例如，桃)、梨类(梨属，例如，洋梨)、梅类(李属，例如，欧洲李)、草莓类(草莓属，例如，Fragaria moschata)、番茄类(番茄属，例如，番茄)，叶用作物，如苜蓿类(苜蓿属，例如，紫苜蓿)、甘蓝类(例如，甘蓝)、菊苣类(菊苣属，例如，Cichoreum endivia)、韭类(葱属，例如，葱)、莴苣类(莴苣属，例如，生菜)、菠菜类(菠菜属，例如，菠菜)、烟草类(烟草属，例如，烟草)，根用作物，如葛类(竹芋属，例如，竹芋)、甜菜类(甜菜属，例如，甜菜)、胡萝卜类(Daucus，例如，carota)、木薯类(Manihot，例如，esculenta)、萝卜类(芸苔属，例如，芜菁)、小萝卜类(萝卜属，例如，蓝花子)、薯蓣类(薯蓣属，例如，有刺甘薯)、甘薯(lpomoea batatas)以及生产种子的作物，如豆类(菜豆属，例如，菜豆)、豌豆类(豌豆，例如，豌豆)，大豆类(大豆属，例如，大豆)、小麦类(小麦属，例如，小麦)、大麦类(大麦属，例如，大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：R·F·比德克尔，
申请(专利权)人：吉斯特·布罗卡迪斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：