成纤维细胞生长因子-14制造技术

本发明专利技术公开了一种人成纤维细胞生长因子－１４多肽以及编码该多肽的ＤＮＡ（ＲＮＡ）。本发明专利技术还提供了一种通过重组技术生产该多肽的方法。本发明专利技术还公开了利用这种多肽以促进伤口愈合的方法，例如治愈烧伤与溃疡，防止由于中风所致／与中风有关的神经元的损伤及促进神经元生长的方法，防止皮肤老化与头发脱落的方法，在早期胚胎中刺激血管生成、中胚层诱导的方法以及促进四肢再生的方法。本发明专利技术也公开了抗这种多肽的拮抗剂及其用作一种防止异常细胞增殖，血管过多的疾病以及上皮晶状体细胞增殖的治疗剂的用途。本发明专利技术还公开了一种用于检测在编码序列中的突变以及在从宿主得到的样品中该多肽浓度改变的诊断方法。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及最近鉴定的多核苷酸，该多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸和多肽的用途以及该多核苷酸和多肽的生产。更具体地讲，本专利技术的多肽经推断鉴定为成纤维细胞生长因子/肝素结合生长因子，在下文中称作“FGF-14”。本专利技术也涉及抑制该多肽的作用。成纤维细胞生长因子是具有与肝素结合的特征的一个蛋白质家族，并且因此也称之为肝素结合生长因子(HBGF)。发现这些蛋白质的不同成员在不同的组织中表达，并且这种表达处于特定的时序和空间的控制之下。对于中胚层、外胚层以及内胚层起源的各种细胞而言，这些蛋白质是有效的促细胞分裂剂，上述细胞包括成纤维细胞，角膜及血管内皮细胞，粒细胞，肾上腺皮质细胞，软骨细胞，成肌细胞，血管平滑肌细胞，上皮晶状体细胞，黑色素细胞，角质形成细胞，少突神经胶质细胞，星形细胞，成骨细胞以及造血细胞。每种蛋白质成员都具有与其它蛋白质成员重叠的功能，并且也具有其独特的功能范围。除具有刺激血管内皮细胞增殖的能力以外，FGF-1与2均对内皮细胞具有趋化性，并且已经表明FGF-2可以使内皮细胞渗透至基底膜。按照这种性质，FGF-1与2均具有刺激血管生成的能力。这些生长因子另一个重要的特征为其促进伤口愈合的能力。FGF家族中许多其它的成员都享有与FGF-1与2类似的活性，例如促进血管生成与伤口愈合的活性。已经表明FGF家族的几个成员可以诱导中胚层的形成并且可以调节神经元细胞，脂肪细胞和骨骼肌细胞的分化。除了这些在正常组织中的生物学活性以外，已经暗示FGF蛋白通过促进肿瘤血管生成以促进癌症和肉瘤中的肿瘤发生，并且当其表达失控时这些蛋白可以充当转化蛋白。FGF家族目前由8个在结构上相关的多肽组成碱性FGF，酸性FGF，int 2，hst 1/k-FGF，FGF-5，FGF-6，角质形成细胞生长因子，AIGF(FGF-8)，并且近来已经表明一种神经胶质活化因子是一种新的肝素结合生长因子，该因子是从一种人神经胶质瘤细胞系的培养上清液中纯化出来的(Miyamoto，M.等，分子和细胞生物学，13(7)4251-4259(1993))。每种多肽的基因已经被克隆并且进行了测序。该成员中的两种，即FGF-1与FGF-2已被赋予了许多名称，但是最常用的分别称作酸性和碱性成纤维细胞生长因子。正常的基因产物影响了大多数由中胚层和神经外胚层所产生的细胞一般的增殖能力。它们能够诱导体内的血管生成并且可以在早期发育中发挥重要的作用(Burges s，w.H.和Maciag，T.，生化回顾年报，58575-606，(1989))。许多上面所鉴定的FGF家族的成员也可以结合到同样的受体上，并且通过结合到这些受体上而诱导第二信使。通过基因转移已经把编码一种分泌型FGF-1的真核表达载体引入到猪动脉中。这一模型确定了位于体内动脉内壁的基因功能。在基因转移21天后，FGF-1的表达诱导猪动脉内膜加厚(Nabel，E.G.，等，自然，362844-6(1993))。这进一步表明碱性成纤维细胞生长因子可以调节神经胶质瘤的生长与恶化，其中的生长与恶化不依赖于该因子在肿瘤血管生成中所起的作用，并且表明碱性成纤维细胞生长因子的释放或分泌可能是这些作用所需要的(Morrison，R.S.，等，神经科学研究杂志，34502-9(1993))。已经进一步暗示出象碱性FGF这样的成纤维细胞生长因子在体外卡波西肉瘤细胞的生长中起作用(Huang，Y.Q.，等，临床研究杂志，911191-7(1993))。而且，在由噬菌体T7 RNA聚合酶所识别的转录启动子的下游已克隆了编码人的碱性成纤维细胞生长因子的cDNA序列。已经表明由此得到的碱性成纤维细胞生长因子具有无法区别于人胎盘成纤维细胞生长因子在促有丝分裂活性(mitogenicity)、血纤蛋白溶酶原激活剂的合成与血管生成测定方面的生物活性(Squires，C.H.，等.生物化学杂志，26316297-302(1988))。美国专利No.5，155,214公开了基本上纯的哺乳动物的碱性成纤维细胞生长因子及其生产。该专利公开了牛与人的碱性成纤维细胞生长因子的氨基酸序列以及编码牛物种的这一多肽的DNA序列。最近发现FGF-9与FGF家族的其它成员间具有大约30％的序列相似性。该家族成员中的两个半胱氨酸残基与其它的共有序列在FGF-9的序列中也是完全保守的。人们发现FGF-9在其N末端没有象在酸性与碱性FGF中的典型信号序列。但是，尽管FGF-9缺乏一种典型的信号序列FGF，人们发现在合成后它却可以从细胞中分泌出来(Miyamoto，M.等，分子和细胞生物学，13(7)4251-4259(1993))。而且，人们发现FGF-9刺激少突神经胶质细胞类型2星形细胞祖细胞、BALB/c3T3与PC-12细胞的细胞生长，但却不促进人脐静脉内皮细胞的生长(Naruo，K.，等.生物化学杂志，2682857-2864(1993))。碱性FGF与酸性FGF是细胞增殖，细胞活动性，分化与存活的有效的调节剂，并且影响来自于外胚层，中胚层与内胚层的细胞类型。通过蛋白质的纯化鉴定了这两类FGFs以及KGF和AIGF。但是，其它的四个成员作为癌基因而被分离，其中基因的表达局限于胚胎发育与某种类型的癌症。已经表明FGF-9是一种抗神经胶质细胞的促细胞分裂原。曾报道FGF家族的成员具有致癌的潜能。当将FGF-9转化到BALB/c3T3细胞中时，已经表明FGF-9具有转化的潜能(Miyamoto，M.，等，分子细胞生物学，13(7)4251-4259(1993))。又被称作FGF-8的雄激素诱导生长因子(AIGF)是从以睾酮刺激的小鼠乳房癌细胞(SC-3)的条件培养基中纯化出来的。AIGF是特殊的一类FGF生长天子，它具有推定的信号肽并且与FGF家族的已知成员间享有30-40％的同源性。采用AIGF转化的哺乳动物细胞显示出对缺乏雄激素的SC-3细胞的生长具有显著的刺激效应。由于AIGF可以通过肿瘤细胞自身分泌出来，因此AIGF介导了SC-3细胞并且可能还有其它细胞的雄激素诱导的生长。由于本专利技术的多肽的氨基酸序列与FGF家族其它成员的同源性，已经推断鉴定该多肽为FGF家族的一个成员。根据本专利技术的一个方面，提供了新的成熟多肽及其具有生物学活性并在诊断学或治疗学上有用的片段，类似物与衍生物。本专利技术的多肽是人源的。根据本专利技术的另一个方面，提供了编码本专利技术的多肽的分离的核酸分子，该核酸分子包括mRNAs，DNAs，cDNAs.基因组DNA，以及它的反义类似物和其具有生物学活性并在诊断学或治疗学上有用的片段。根据本专利技术的另一个方面，提供了通过使用诸如在本专利技术的多肽的重组生产中用作试剂的克隆和表达质粒的重组载体通过重组技术生产这种多肽的方法，以及含有编码本专利技术的多肽的核酸序列的重组原核和/或真核宿主细胞。根据本专利技术的再一个方面，提供了一种利用该多肽或编码该多肽的多核苷酸用于筛选其兴奋剂(agonist)及其拮抗剂以及用于治疗目的的方法，例如促进伤口愈合，比如治愈烧伤与溃疡，防止由于与中风有关的神经元的损伤并促进神经元的生长，防止皮肤老化与头发脱落，刺激在早期胚胎中血管生成、中胚层诱导以及刺激四肢再生。根据本专利技术的又一个方面，提供了抗这种多肽的抗体。根本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多核苷酸，它包括选自如下一组中的一个成员：（ａ）一种编码包括如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的第－２６位氨基酸至第１９９位氨基酸的多肽的多核苷酸；（ｂ）一种编码包括如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的第１位氨基酸至第１９９位氨基酸的 多肽的多核苷酸；（ｃ）一种能够与（ａ）或（ｂ）的多核苷酸杂交并且与（ａ）或（ｂ）的多核苷酸之间至少有７０％相同性的多核苷酸；以及（ｄ）（ａ），（ｂ）或（ｃ）的多核苷酸的一个多核苷酸片段。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰M格林，帕特里克J迪龙，
申请(专利权)人：人体基因组科学有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]