增强保护性免疫应答的方法技术

用于制备在病人体内增强或引发针对某抗原的免疫应答的药物的、包括一种抗原和一种ＬｂｅＩＦ４Ａ多肽的组合物，其中ＬｂｅＩＦ４Ａ多肽包括选自下组的ＤＮＡ序列所编码的氨基酸序列： （ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１的１１５－１３２３位核苷酸； （ｂ）在中等严紧的条件下与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１ １１５－１３２３位核苷酸互补链杂交的ＤＮＡ序列，其中该ＤＮＡ序列编码可以刺激从利什曼原虫感染个体所得外周血单核细胞的Ｔｈ１免疫应答的多肽。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本申请为美国专利申请No.08/607,509的部分继续申请，后者递交于1996年2月23号，为递交于1995年6月6号的美国专利申请No.08/488,386的部分继续申请，申请No.08/488,386为递交于1994年4月22号的美国专利申请No.08/232,543的部分继续申请。本专利技术大体涉及在病人体内、分离细胞和细胞培养中增强免疫应答的化合物和方法。本专利技术特别涉及包含作为真核启动因子4A(eIF4A)同源类似物的利什曼原虫抗原的全部或部分的化合物及其在刺激免疫应答的疫苗中的应用。疫苗通常通过在病人体内产生对感染或疾病相关的特异性抗原的免疫应答来引发对感染或疾病的免疫。利用现代技术对适当抗原的识别和应用使试验和发展大量针对常见感染(包括细菌，病毒和原生动物感染)以及像癌等疾病的疫苗变得可能。但是，在许多情况下，纯化的抗原免疫原性很低，即一个特异性抗原所产生的免疫应答尽管针对需要的靶位，但没有足够的强度提供免疫保护。在这种情况下，必须加入一种免疫调节剂，如一种佐剂或免疫刺激剂，来加强免疫应答。佐剂是那种与抗原同时注射或与抗原注射于同一部位时可加强抗原特异性免疫应答的物质。佐剂的作用机理很多，包括以下几种(1)捕捉并缓慢释放抗原，(2)促使细胞向注射部位移动，(3)刺激或捕捉淋巴细胞，或是刺激淋巴细胞增殖，(4)促进抗原在病人体内散布。例如，油类、聚合物、矿物盐和脂质体由于具有这方面的特点而被用作佐剂。与佐剂相此，免疫刺激物是那种引发病人免疫应答普遍性、阶段性提高的物质，这种提高与其是否于与抗原同时注射无关。细菌是典型的免疫刺激物，如BCG(结核分枝杆菌的一种减毒株)或小棒状杆菌的失活株。无论哪一种机制，佐剂和免疫刺激物都是通过非特异的方式来增强目的特异性免疫应答。目前可得到的许多佐剂的一个严重缺陷是其毒性。一般说来，最合适的佐剂(即能够最大限度地增强目的免疫应答的那些)同时毒性也最大。因此，实施者必须不断权衡佐剂的刺激水平和毒性。因此，有必要发现既可以提供想要的对特异性免疫应答的增强作用，而毒性又低的化合物。本专利技术不仅满足了这方面的需要，而且进一步具有其他相关优点。简而言之，本专利技术提供了有关与真核核糖体蛋白eIF4A同源的利什曼原虫抗原LbeIF4A或LmeIF4A的化合物和方法。一方面，本专利技术提供了在病人体内增强或引发对一种抗原和/或DNA疫苗编码抗原免疫应答的方法，包括给予病人一种抗原和/或DNA疫苗以及一种LbeIF4A多肽，该LbeIF4A多肽包括选自下组的一个DNA序列编码的氨基酸序列(a)SEQ ID NO1 115-1323位核苷酸；(b)在中等严紧的条件下可以同SEQ ID NO1 115-1323位核苷酸互补链杂交的DNA序列，其中的DNA序列编码可以刺激从利什曼原虫感染个体所得外周血单核细胞的Th1免疫应答的多肽。另一方面，本专利技术提供了在病人体内增强或引发对一种抗原和/或DNA疫苗编码抗原免疫应答的方法，包括给予病人一种抗原和/或DNA疫苗以及一种LmeIF4A多肽，该LbeIF4A多肽包括选自下组的一个DNA序列编码的氨基酸序列(a)SEQ ID NO.3 117-1325位核苷酸；(b)在中等严紧的条件下可以同SEQ ID NO.3 117-1325位核苷酸互补链杂交的DNA序列，其中的DNA序列编码可以刺激从利什曼原虫感染个体所得外周血单核细胞的Th1免疫应答的多肽。在其他相关方面，本专利技术提供了在病人体内增强或引发对一种抗原和/或DNA疫苗编码抗原免疫应答的方法，包括给予病人一种抗原和/或DNA疫苗以及一种LbeIF4A多肽，该LbeIF4A多肽包括SEQ IDNO.2 49-403位氨基酸，或其保守性替代和/或修饰变体，或给予一种抗原和/或DNA疫苗以及一种LmeIF4A多肽，该LmeIF4A多肽包括SEQ ID NO.4 49-403位氨基酸，或其保守性替代和/或修饰变体。在另外的相关方面，本专利技术提供了在生物样本中增强免疫应答的方法，包括将生物样本与一种抗原和/或DNA疫苗编码的抗原以及上面提到的一种LbeIF4A多肽接触，其中生物样本包括选自外周血单核细胞、单核细胞、B细胞、树突细胞以及其组合的细胞。在另一相关方面，本专利技术提供了在生物样本中增强或引发免疫应答的方法，包括将生物样本与如上所述的LmeIF 4A多肽接触，其中生物样本含有选自外周血单核细胞、单核细胞、B细胞、树突细胞及其组合的细胞。在另一相关方面，本专利技术提供了在病人体内增强对一种肿瘤免疫应答的方法，包括给予病人一种肿瘤抗原和/或DNA疫苗以及上面提到的一种LbeIF4A多肽或LmeIF4A多肽。在另一相关方面，本专利技术提供了治疗病人体内一种肿瘤的方法，包括给予病人上面提到的一种LbeIF4A多肽或LmeIF4A多肽。在上面所提到的每个方面中，可以用病毒载体或核酸分子(总称为“核酸组份”)替代LbeIF4A或LmeIF4A多肽，这种核酸组份指采用感染或转染了核酸组份的病人细胞表达这些多肽。核酸组份的给药步骤可以体内或离体方式进行，后者包括随后给予感染/转染细胞。另外，当给予一抗原或肿瘤抗原时，显然也可以设计核酸组份以指导这种抗原的表达(应用相同或不同的载体或核酸分子)。参照下面的详细说明及附图可对本专利技术上述的各个方面和其他方面有更清楚的了解。本文所引用的参考文献以其整体引入本文作为参考，相当于每篇逐一引入。附图说明图1给出的是利什曼原虫DNA Southern印迹分析的结果，表明利什曼原虫中保持了eIF4A同源性，并且L.braziliensis基因组DNA至少含有LbeIF4A的两个拷贝。图2为一免疫印迹分析结果，它证明了LbeIF4A免疫免血清可以同不同种利什曼原虫的一个约45KDa的优势蛋白反应。图3说明了纯化的重组LbeIF4A可以刺激L.braziliensis感染个体外周血单核细胞的增殖。图4A和4B给出的是确认为有L.braziliensis感染的病人外周血单核细胞中细胞因子mRNA表达模式的分析结果。图5表明经LbeIF4A或虫体裂解物刺激后，感染了L.braziliensis的病人外周血单核细胞分泌的IFN-γ上清水平。图6表明经LbeIF4A或虫体裂解物刺激后，感染了L.braziliensis的病人外周血单核细胞分泌的IFN-α上清水平。图7A-D表明，用LbeIF4A刺激病人外周血单核细胞分泌到培养上清中的IL-12要比用虫体裂解物刺激的IL-12水平明显高，并且IL-10抑制IL-12的产生。图8A和B证明，在所有被检测病人外周血单核细胞中IFN-γ的产生依赖于IL-12，但被IL-10抑制。图9A和9B表明LbeIF4A可刺激培养的人巨噬细胞及粘附性外周血单核细胞中IL-12的产生。图10表明LbeIF4A可刺激人骨髓白血病细胞系THP-1中IL-12p40的产生，并与IFN-γ协同作用刺激THP-1细胞分泌IL-12。图11是表明LbeIF4A致敏的小鼠淋巴结细胞增殖并分泌几乎单一的Th1细胞因子的结果。图12说明LbeIF4A对一个与人类疾病相关的动物模型的L.major感染可提供显著的保护。图13说明用代表性LmeIF4A多肽引发了抗-卵清蛋白CTL。图1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：S·G·芮德，
申请(专利权)人：科里克萨有限公司，
类型：发明
国别省市：