一种分离差异表达基因的方法技术

本发明专利技术涉及分离差异表达基因的方法。本方法首先将对应细胞群体的总体核糖核酸（总ＲＮＡ），用一组６碱基（６ｍｅｒ）的随机引物进行反转录（ＲＴ）合成互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ），随后选用单一、序列确定的１０－１２碱基的随机引物（１０－１２ｍｅｒ）进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），在分离差异表达基因时，用琼脂糖凝胶电泳，避免了使用同位素，能在紫外光下直接观察电泳结果，同时切除差异表达的ｃＤＮＡ带。随后，进行再扩增、克隆、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交鉴定和测序。本发明专利技术适用于所有生物的２个或２个以上相对应细胞群体，是一种简单、快速和经济的基因分离方法。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种分离差异表达基因的方法，其特征在于它包含下列各步骤：（１）常规提取２个或２个以上相对应细胞群体的总ＲＮＡ；（２）将总ＲＮＡ用一组６碱基随机引物进行反转录合成ｃＤＮＡ，随后，用该ｃＤＮＡ选用单一、１０－１２碱基的序列确定随机引物进 行ＲＴ－ＰＣＲ；（３）琼脂糖凝胶电泳分离差异表达的ｃＤＮＡ片段；（４）将差异表达的ｃＤＮＡ片段ＰＣＲ再扩增，并直接克隆至ｐＣＲⅡ克隆载体；（５）使用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交鉴定差异表达ｃＤＮＡ片段的特异性并测序进行同源性比较。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑坚瑜，陈晶，鲍云鹤，肖文鸾，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]