本发明专利技术涉及从有某种确定表型的人或高等动植物的复杂基因组中可直接准确地分离出该表型相关基因的开关区，并可进一步筛出能促使细胞改变其表型（相关基因表达状态）的基因开关分子，进而建立一种按自然程序或模拟自然程序控制靶基因表达的方法。特别涉及一种能高效、精确地灭活人类致病基因等有害基因，激活人类疾病控制基因及经济动、植物高产、优质、抗病、抗逆等有益基因的方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种直接分离表型相关基因开关区和开关分子的方法，其特征在于包括下列步骤：第一步，提纯具有目标表型的样本和不具有目标表型的对照本细胞ＤＮＡ和特异性ＤＮＡ结合蛋白（开关分子），并使二者结合在一起。用同样的限制酶切割后，去除所有未能结合的蛋白和ＤＮＡ片段；第二步，把样本和对照本的开关区ＤＮＡ片段／开关分子结合体（ＲＦ／ＢＰ结合体）混合后单向或差异双向电泳，使１０↑［４］种ＲＦ／ＢＰ结合体分散到凝胶中，减少同一位置重叠在一起片段的种数；第三步，将上述凝胶中ＲＦ／ＢＰ结合体尽快纵向（与凝胶垂直）转入一空心胶中，并使样本ＲＦ／对照本ＲＦ，或者样本ＲＦ／对照本ＢＰ间在电泳原位相互杂交或剂量比较；第四步，把不杂交的差异开关区片段和表达区片段，以及杂交形成错配区的点突变片段和杂交形成半甲基化区的点修饰片段单独分离到试管中，或固定在试管中而把其它片段洗脱；第五步，把分离到的差异片段两个末端连接上接头或载体，通过ＰＣＲ扩增为探针；第六步，用从具有相同生理或病理表型的不同细胞中分离到的开关区探针与样本细胞核内蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交，或者再与从相同表型细胞分离到的突变片段和差异表达区片段（ｃＤＮＡ）探针一起与标准人类基因组ＤＮＡ的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹以及样本细胞的ｍＲＮＡ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交，等位显示点即包含有目标表型相关基因的表达区、开关区和开关分子；第七步，用分离到的表型相关基因开关区片段或开关分子（结合蛋白）为配体，通过对流亲合层析法杂交、固定所有表型相关基因之大限制片段，并进一步杂交吸附所有表型相关基因ｃＤＮＡ片段；第八步，用表型相关基因开关区／ｃＤＮＡ探针分别与形成该目标表型的不同发育或病变阶段之细胞核蛋白Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹和ｍＲＮＡ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交，确定表型相关基因开关区的开关时序和最早表达的表型开关基因；第九步，用表型相关基因ｃＤＮＡ为配体，通过亲和层析吸附纯化表型相关的ｍＲＮＡ，并把它们置于兔网织红细胞提取液中合成相应蛋白质，标记为探针，用开关区探针和这些表达区探针与处于激活态的表型细胞全蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交，从而分析表型相关基因的表达区开关的位序和最早激活的激素开关基因；第十步，用表型开关基因开关区的识别基序为配体，通过亲和层析吸附、纯化相应的开关分子，测其氨基酸顺序而确定之，或者用表型开关基因开关区识别基序联体为探针以及激素开关基因表达区调节亚基蛋白为探针在随机／非随机（胚胎ｃＤＮＡ）噬...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：卞小庄，
申请(专利权)人：卞小庄，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]
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