红豆杉细胞培养中筛选紫杉醇高产细胞株的方法技术

本发明专利技术涉及红豆杉细胞培养中筛选紫杉醇高产细胞株的方法。红豆杉的外植体经诱导得到愈伤组织，进行初步筛选后，利用单细胞克隆方法获得大量克隆细胞，继代扩大培养后进行分析、筛选和稳定性试验，获得生长速率为０．５２ｇ（ｄｗ）／Ｌ．ｄ、紫杉醇含量为０．１％的细胞优株，紫杉醇含量较原植物提高了１０倍。本发明专利技术具有简便、快捷选取紫杉醇高产细胞株的特点，能节省大量人力、物力、提高劳动生产率。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物细胞工程，特别是一种从红豆杉愈伤组织中筛选紫杉醇高含量细胞株的方法。紫杉醇(Taxol)是从红豆杉属植物中分离得到的一种抗癌药物，已被证明对治疗卵巢癌、乳腺癌及肺癌等有效。目前，紫杉醇的提取都以红豆杉属植物树皮为原料，不仅破坏环境、危及红豆杉资源，且因红豆杉属植物生长缓慢、紫杉醇含量低，所以药源奇缺、价格昂贵。另外，全化学人工合成法虽已成功，但因其代价极其昂贵而不能用于实际生产。因此，必须寻找可替代的生产途径，利用红豆杉植物组织、细胞培养法生产紫杉醇被认为是解决的途径之一。要进行工业化生产，目前培养物的紫杉醇含量低仍是制约因素，解决的途径之一是进行高产细胞株的筛选和培养。由外植体诱导获得的愈伤组织紫杉醇含量普遍比较低(约占细胞干重的0.0001～0.001％)，远低于原植物紫杉醇含量(约占干重的0.001～0.01％)，因此，有必要对愈伤组织进行筛选。应用植物细胞筛选方法从中选出紫杉醇含量高的个体，进一步培养成具有优良性状的细胞株。现有技术中昆明植物研究所的郑光植等人作了关于植物细胞优株筛选的叙述，但各种植物细胞的生理特性不同，所需的培养条件、细胞密度、培养方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种红豆杉细胞培养中筛选紫杉醇高产细胞株的方法，其特征在于： （１）红豆杉外植体用自来水洗净后，用酒精和次氯酸钠消毒，然后用蒸馏水清洗并截短至１～２厘米长，在其上划有伤痕后接种到固体培养基中培养２～５周诱导获得愈伤组织，愈伤组织在固体培养基上每２０～２５天继代一次，继代时，比较培养物的外观性状（颜色、形态、含水量）选择生长快、颜色浅、颗粒较明显的（均匀小粒）细胞进行继代培养，并进行紫杉醇的定量分析，从中选出含量高的继续培养； （２）经初步筛选获得的愈伤组织转移到液体培养基中进行悬浮培养，每１０天继代一次。待第３代培养３～１５天后，取出静置片刻，在无菌条件下将上层含有单细胞或小细胞团...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李志良，黄巧明，张庆云，侯嵩生，
申请(专利权)人：梅县梅雁生物工程研究所，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]