具有改进的洗涤性能的多肽-聚合物缀合物制造技术

本发明专利技术涉及有一或多个聚合物共价偶联至亲本多肽上的多肽－聚合物缀合物，其中，聚合物为均聚物，接枝共聚物、嵌段共聚物、交替共聚物或无规共聚物。本发明专利技术也涉及包含本发明专利技术缀合物的工业组合物和产品，还涉及所述缀合物在改善工业组合物和产品如洗涤剂组合物的洗涤性能中的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多肽-聚合物缀合物，其中聚合物是偶联在多肽表面的均聚物、接枝共聚物、嵌段共聚物、交替共聚物、或无规共聚物。本专利技术还涉及包含本专利技术缀合物的工业组合物和产品、本专利技术多肽-聚合物缀合物用于改进工业组合物和产品的洗涤性能的用途，还涉及改进多肽的洗涤性能的方法。
技术介绍
在洗涤剂工业中，酶应用于清洗配方已经超过30年了。应用于这些配方中的酶包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、以及其它酶，或它们的混和物。商业上最重要的酶是蛋白酶。与日俱增的商业使用的酶(如蛋白酶)是天然产生的野生型蛋白酶经蛋白质工程改造的变体，如DURAZYM(Novo Nordisk A/S)、RELASE(Novo Nordisk A/S)、MAXAPEM(Gist-BrocadesN.V.)、PURAFECT(Genencor International,Inc.)。然而，虽然文献中已经公开了许多有用的酶变体，仍然需要新的改进的酶或酶变体，用于许多工业用途。由于多肽可能会引起非期望的免疫应答--由施用方式决定--通常是IgG和/或IgE应答，最近30年中已经发展了降低免疫应答的技术。WO 97/24421和WO 97/24427公开了通过共价结合到激活的聚合物上而对酶进行固定化。使用激活的聚合物对一种或多种酶的固定化，尤其显示出酶蛋白质的改进的抗原性特性。专利技术人声称，可以通过酶的结构性修饰实现改进，而不影响酶在洗涤剂溶液中的性能特性。虽然固定化有可能避免形成空气传播物质，但是在固定化步骤的操作过程中，该方法仍然存在形成粉尘或气溶胶的风险。另一种技术是偶联技术，其中许多聚合分子与目的多肽偶联。当使用该技术时，免疫系统难以识别多肽表面上负责形成抗体的表位，由此降低免疫应答。对于直接引入人体循环系统以产生特殊生理学效应的多肽(即药物)，典型的潜在免疫应答是IgG和/或IgM应答，而通过呼吸系统吸入的多肽(即工业多肽)可能引起IgE应答(即变态反应)。解释免疫应答降低的一种理论是聚合分子可屏蔽多肽表面上负责导致抗体形成的免疫应答的表位。另一种理论(或至少是部分因素)是缀合物越巨大，产生的免疫应答降得越低。通常用于与多肽偶联以形成缀合物的聚合物是均聚物，即由一种重复单位组成，如环氧乙烷(EO)、聚乙二醇(PEG)、或环氧丙烷(PO)、聚丙二醇(PPG)。糖类，诸如葡聚糖，也已经使用。美国专利号4,179,337涉及非免疫原性的多肽，诸如与聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇(PPG)偶联的酶和肽激素。WO 96/17929(Novo Nordisk A/S)涉及与聚合分子(特别是聚乙二醇(PEG))偶联的经修饰的多肽缀合物。现在本专利技术的专利技术人已经令人惊讶的发现，与未修饰的多肽相比，聚合物-多肽缀合物具有改进的洗涤性能。专利技术概述在第一个方面，本专利技术涉及具有改进的洗涤性能的多肽-聚合物缀合物。本专利技术的专利技术人发现，如果将分子量0.1-60 kDa的均聚物与分子量4-100 kDa的亲本多肽进行偶联，则与亲本多肽的洗涤性能相比，该多肽的洗涤性能可得到改进。本专利技术的专利技术人还发现，如果将接枝共聚物、嵌段共聚物、交替共聚物、或无规共聚物(具有通式EOxPOy(Ⅰ)，其中x=1-99％,y=1-99％，且x+y=100％)与用于工业用途的亲本多肽进行共价偶联，则与亲本多肽相比，其洗涤性能可得到改进。在这两种情况中，与亲本酶相比，其呼吸变应性也可能降低。在后一种情况中，甚至与偶联PEG或其它均聚物的相应缀合物相比，其呼吸变应性可能有降低。在第二个方面，本专利技术涉及在包含本专利技术缀合物的工业产品中使用的组合物。在第三个方面，本专利技术涉及使用缀合物改进洗涤性能。在最后一个方面，本专利技术涉及改进多肽洗涤性能的方法。工业多肽用于工业应用的多肽通常具有酶促和/或抗微生物活性。工业多肽(与药物多肽相反)并不旨在引入人体循环系统。因此，作为工业组合物和/或产品(由下文定义)(诸如衣物和碗碟洗涤剂、用于处理纺织品的组合物、和个人护理产品(包括化妆品))中的活性成分使用的工业多肽(诸如酶)，不太可能与人或动物的循环系统直接接触，因为并不将这些多肽(或包含这些多肽的产品)注射(或类似的)到血流中。因此，在工业多肽的情况中，潜在风险是通过呼吸途径吸入多肽引起的呼吸变态反应(即IgE应答)。在本专利技术的内容中，“工业多肽”定义为并不旨在引入人和/或动物体循环系统的多肽，包括肽、蛋白质和/或酶。这些多肽的实例包括具有下文定义的酶活性的多肽。然而，如果将一种或多种聚合物与酶进行偶联，则与亲本酶相比，该酶的性能将保持大致相同或降低。酶的催化性能取决于酶和底物在活性位点接触等许多因素。如果将聚合物与酶进行偶联，聚合物通常将以随机方式分布于酶的表面。而且，聚合物将与酶在该酶的活性位点附近偶联，导致空间位阻。因此预测酶的性能将受到不利影响。本专利技术的专利技术人已经令人惊讶的发现，通过与聚合物的缀合，酶的性能可能增强。专利技术详述现在本专利技术的专利技术人已经令人惊讶的成功提供了多肽-聚合物缀合物，其中多肽的催化性能得到了改进。本专利技术涉及适合工业应用和作为活性成分掺入工业产品中的多肽-聚合物缀合物。本专利技术的缀合物还可能具有降低的呼吸变应性。术语“多肽-聚合物缀合物”，在本专利技术的内容中，指一种或多种聚合物已经与多肽共价结合。术语“降低的变应性”，在本专利技术的内容中，指当吸入本专利技术的经修饰多肽后，与相应的亲本多肽相比，其产生的可以导致变态状态的IgE(在人体中，在特定动物中为具有可比性能的分子)的量降低了。也可以使用术语“呼吸变应性”。术语“改进的洗涤性能”，在本专利技术的内容中，指与用亲本酶(非缀合物)清洗的测试物的Δ反射度值(delta reflectance)相比，用缀合物清洗的测试材料的Δ反射度值增加了。当术语“改进的洗涤性能”与如皮肤护理产品一起使用(其中不能得到Δ反射值)时，该术语指与使用亲本酶(非缀合物)时的清洁效果相比，其清洁效果得到了改进。本专利技术的专利技术人已经发现，如果将亲本未修饰多肽与均聚物、接枝共聚物、嵌段共聚物、交替共聚物、或无规共聚物进行偶联，则洗涤性能可得到改进。与相应的亲本未修饰多肽相比，吸入多肽引起的潜在的变应原性应答也可能降低。在一个方面，本专利技术涉及缀合物，其中亲本多肽可以与分子量100-10,000 Da，优选100-5,000 Da，更优选100-2,000 Da,特别是100-1,000 Da的聚合分子偶联。由于已知短/轻聚合分子抑制多肽功能活性的倾向较小，所以将短/轻聚合分子与目的多肽偶联是有利的。例如，与偶联了大/重聚合分子的相应酶相比，底物更容易到达与分子量范围符合本专利技术实施方案的聚合分子偶联的酶的活性位点，因为此时聚合分子的空间位阻较不显著。而且，多肽结构的变形最小，与含有较大/较重聚合分子和多肽偶联的缀合物相比，含有较小/较轻聚合分子的多肽-聚合物缀合物具有改进的稳定性，因为将多肽结构推向不同方向的重量较小。使用小聚合分子的另一个好处是，它们更便宜，因为聚合物是论公斤卖的。这降低了生产本专利技术缀合物的成本。此外，与固定化的酶(如酶与具有多个反应基团的活化聚合物的多价共价连接)相比，本专利技术的缀合物显示单个聚合物分子共价连接到蛋白质表面上。这避免了酶的交联，导致催化剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有改善洗涤性能的多肽－聚合物缀合物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：P鲍迪兹，TM富特姆，AA奥尔森，HJ德森，DA彼德森，
申请(专利权)人：诺沃奇梅兹有限公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]