一种制备重组人α‑L‑艾杜糖醛酸酶的方法技术

本发明专利技术涉及一种人α‑L‑艾杜糖醛酸酶表达载体，它是pCMV‑IDUA表达质粒。以及一种重组人α‑L‑艾杜糖醛酸酶的制备方法。本发明专利技术通过克隆表达编码人α‑L‑艾杜糖醛酸酶的基因，转染中国仓鼠卵巢细胞系DG44，并在该细胞中实现了α‑L‑艾杜糖醛酸酶的稳定表达。最终获得的α‑L‑艾杜糖醛酸酶具有催化底物α‑Liduronide酶促反应的生物活性，适合用于治疗因α‑L‑艾杜糖醛酸酶缺乏致糖胺聚糖降解代谢障碍引发的粘多糖贮积症I型（MPS‑Ⅰ）。

【技术实现步骤摘要】
一种制备重组人α-L-艾杜糖醛酸酶的方法
本专利技术属于基因工程
，涉及人α-L-艾杜糖醛酸酶基因重组载体，用该载体转化的宿主重组表达人α-L-艾杜糖醛酸酶的方法及应用。
技术介绍
粘多糖贮积症(Mucopolysaccharidosis，MPS)由酸性粘多糖降解酶缺乏，致糖胺聚糖降解代谢障碍引起，根据不同酶缺陷(大约10余种)，临床上又分为8型，其中MPS-Ⅰ是我国发病率相对较高的类型。溶酶体α-L-艾杜糖醛酸酶(α-L-iduronidase,IDUA)缺陷致糖胺聚糖(glycosaminoglycans，GAGs)降解代谢障碍引发MPS-Ⅰ，多在婴儿或儿童期发生，是一种致残、致死性遗传性代谢疾病。重组人α-L-艾杜糖醛酸酶(recombinantα-L-iduronidase,rhIDUA)作为酶替代治疗(ERT)药物在临床治疗显示患者均能安全度过童年期，且伴随明显的认知功能恢复和某些症状的改善。除ERT治疗手段外，造血干细胞治疗也是十分有效的手段。ERT以及造血干细胞治疗目前在中国仍属于空白领域，虽然，中国专利(CN201180051220.1)公开了一种反义寡核苷酸，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人α‑L‑艾杜糖醛酸酶表达载体，其特征在于，它是pCMV‑IDUA表达质粒。

【技术特征摘要】
1.一种人α-L-艾杜糖醛酸酶表达载体，其特征在于，它是pCMV-IDUA表达质粒。2.一种pCMV-IDUA表达质粒构建方法，其特征在于，用BglII和PacI对pCMV质粒进行双酶切后回收大片段，再用BglII和PacI对pUC-IDUA质粒进行双酶切回收目的基因片段，酶切后将产生相同黏性末端的载体片段与目的基因进行连接。3.制备人α-L-艾杜糖醛酸酶的方法，其特征在于，包括用上述pCMV-IDUA表达质粒转化宿主细胞，培养转化体，获得人α-L-艾杜糖醛酸酶。4.权利要求3所述方法，其特征在于，所述宿主细胞是中国仓...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小章，高小平，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：四川,51