用于染色观察的细胞培养皿及细胞培养染色、观察方法技术

本发明专利技术公开了用于染色观察的细胞培养皿及细胞培养染色及观察方法，包括培养皿体、培养皿盖，在培养皿体一侧设有手柄，所述培养皿体包括底板，底板上设有若干底板凹槽，底板上部周边设有封闭的垂直密封板，手柄与底板连接，培养皿盖下端面与垂直密封板上端面配合。包括以下步骤：1)培养液配制；2)细胞培养；3)染色；4)显微镜观察。本发明专利技术不需要在培养孔内放置玻片，直接将细胞悬液加到本发明专利技术的特制的细胞培养皿内，不存在玻片漂起以及夹取玻片遇到的问题；染色完成后在倒置显微镜下放置培养皿的底壁直接观察，或者在正置显微镜下将培养皿的底壁反过来放置观察，使细胞层与显微镜镜头能以非常近的距离靠近，特别适于高倍数油镜观察。

【技术实现步骤摘要】
用于染色观察的细胞培养皿及细胞培养染色、观察方法
本专利技术涉及一种细胞培养
，具体是一种用于染色观察的细胞培养皿及细胞培养染色、观察方法。
技术介绍
细胞培养作为一种重要的研究手段，广泛应用于营养学、病理学、环境毒理学、细胞生物学、肿瘤学、基因组学、遗传学以及资源保护等方面，成为科研中不可或缺的技术手段。在试验中，观察细胞形态结构多数情况下需要进行染色(如免疫化学、免疫荧光、苏木精-伊红等染色方法)，因此有必要将细胞培养在合适的载体上以方便在显微镜下观察。目前通常采用细胞“爬片”的方法进行染色观察，就是先将盖玻片冲洗干净，灭菌处理后放在培养板或培养皿的孔内，加入细胞悬液，然后细胞开始在盖玻片上贴壁生长，待贴壁程度达到试验要求时立即在培养孔内进行染色处理，最后将盖玻片取出并放在载玻片上，在显微镜下观察和拍照。也有实验室采用市售的专用玻片，不用进行前期的清洗和灭菌处理，直接放在在培养板或培养皿的孔内接种细胞。然而在试验中发现，不论采用盖玻片还是专用的玻片，都存在以下三个问题：(1)将玻片放在培养孔内，加入细胞悬液后发现玻片会漂起，造成细胞在玻片上下两面都贴壁生长，不利于在显微镜下观察细胞形态。即使在培养孔准备放玻片的位置处先滴少量培养液，然后轻轻放上玻片，使玻片与培养孔看似粘在一起，但也有部分玻片在加入细胞悬液后漂起。(2)玻片上贴壁生长的细胞与培养孔内培养的细胞在形态和功能上有少许差别，玻片上生长的细胞偏离正常细胞形态，分泌功能降低，比如脂肪细胞内脂滴形成速度变慢。(3)染色处理完成后用镊子将玻片取出，由于玻片较薄，夹取时力度不好控制，力量大时会将玻片夹碎，力量轻时玻片会滑落。
技术实现思路
为了克服上述现有技术存在的缺点，本专利技术提供了一种专门用于染色观察的细胞培养皿。本专利技术结构紧凑、方便握持，不需要在培养孔内放置玻片，而是直接将细胞悬液加到本专利技术的特制的细胞培养皿内，因此不会存在加入细胞悬液后玻片漂起以及夹取玻片遇到的问题；染色完成后，将培养皿侧壁掰掉，用透明封口胶封片；在倒置显微镜下将特制培养皿的底壁直接放置观察，在正置显微镜下将特制培养皿的底壁反过来放置并观察，这样使细胞层与显微镜镜头能以非常近的距离靠近，特别适于高倍数油镜观察。本专利技术还提供一种细胞培养染色及观察方法。本专利技术的技术方案是：一种细胞培养皿，包括培养皿体、培养皿盖，在培养皿体一侧设有手柄，所述培养皿体包括底板，底板上设有若干底板凹槽，底板上部周边设有封闭的垂直密封板，所述手柄与底板连接，培养皿盖下端面与垂直密封板上端面配合。所述垂直密封板在与底板连接位置的上部外侧设有密封板凹槽，所述密封板凹槽为弧形槽或者由从上向下向内的倾斜面。所述培养皿盖包括上部盖板、与盖板连接的下部凸起一，上部盖板的下端面与垂直密封板上端面配合，所述凸起一位于垂直密封板的内侧、与垂直密封板的上端内侧配合、向下伸入垂直密封板上端面以下，通过凸起一与垂直密封板的上端内侧配合实现培养皿盖的定位。所述培养皿体采用上部开口的长方体空腔结构，在远离手柄一侧的两个垂直边设有培养皿体过渡圆角，下部凸起一的对应位置设有突起过渡圆角。上部盖板的外缘大于垂直密封板上端面外缘。在上部盖板的下端面上与垂直密封板上端面配合的位置设有多个薄的下部凸起二。所述底板凹槽设有多个，多个底板凹槽之间通过中间隔板分开。所述培养皿采用适合细胞贴壁生长的高透明度的聚苯乙烯材料制成。一种细胞培养染色及观察方法，具体包括以下步骤：1)培养液配制每450-500毫升细胞培养液中加入50-60毫升胎牛血清(FBS)、3-5毫升青链霉素混合液、0.01-0.02克Ⅰ型胶原蛋白，根据细胞生长特性、添加合适种类和浓度的生长因子或能量物质，然后经0.22微米滤膜过滤后分装到灭菌的离心管中，每管40-45毫升，放置4℃保存，两周内用完；细胞培养前0.5-1小时将培养液放在37℃水浴锅中预热；2)细胞培养待体外培养的细胞贴壁80-90％后，在培养瓶内加入PBS液冲洗1遍，然后加入含0.05％EDTA的0.25％胰酶放在37℃培养箱内消化3-5分钟，之后加入培养液轻轻吹打成单个游离细胞，调整细胞密度为2-5×104个/ml，在细胞培养皿中加入4-6毫升细胞悬液，最后放在含5％CO2、100％湿度的37℃培养箱内培养；3)染色待底板凹槽31凹槽内细胞80-90％贴壁时进行染色处理，染色处理根据具体的实验目的按照说明书步骤进行，染色完成后将培养皿的周边垂直密封板直接掰掉，在每个底板凹槽31内加入100微升PBS液，用透明封口胶将底板凹槽31封住；(4)显微镜观察在倒置显微镜下将细胞培养皿的底壁放在载物台上，视野对准底板凹槽31，仔细旋转显微镜粗调和微调，直至观察到清晰的细胞形态后拍照；在正置显微镜下将细胞培养皿的底壁反过来放在载物台上，即将透明封口胶封口的面朝下，同样仔细旋转显微镜粗调和微调，直至观察到清晰的细胞形态后拍照。本专利技术的有益效果是：1)本专利技术本专利技术结构紧凑、方便握持，不需要在培养孔内放置玻片，而是直接将细胞悬液加到本专利技术的特制的细胞培养皿内，因此不会存在加入细胞悬液后玻片漂起以及夹取玻片遇到的问题；染色完成后，将培养皿侧壁掰掉，用透明封口胶封片，在倒置显微镜下将特制培养皿的底壁直接放置观察，在正置显微镜下将特制培养皿的底壁反过来放置并观察，这样使细胞层与显微镜镜头能以非常近的距离靠近，特别适于高倍数油镜观察。采用透明封口胶封片，一是避免细胞因蒸发而干燥变形或污染侵蚀镜头，同时可使标本表面平整，有利于观察和拍照；二是在正置显微镜下观察，可以将特制培养皿的底壁反过来放置，使镜头与细胞层能近距离靠近，利于高倍数油镜镜头观察。2)培养液中添加促进细胞贴壁的Ⅰ型胶原蛋白，有利于细胞生长。在细胞培养前，将细胞悬液密度调整为2-5×104个/ml，并且在特制培养皿内加入4-6毫升细胞悬液，这样既有利于细胞贴壁生长和培养液中能量物质充分吸收，又有利于气体交换。3)染色处理时，培养凹槽内细胞培养至80-90％贴壁，这样细胞能均匀分布呈现细胞正常的形态。因为如果细胞贴壁太满，势必细胞生长会太挤，造成细胞变形和单个细胞界限不清晰从而影响观察；如果细胞贴壁太疏松，那么视野中细胞数目较少，影响观察结果的准确性。4)培养皿材料由高透明度的聚苯乙烯为原料制成，适合细胞贴壁生长。5)垂直密封板在与底板连接位置的上部外侧设有密封板凹槽，密封板凹槽为弧形槽或者由从上向下向内的倾斜面。通过在垂直密封板外侧设有密封板凹槽，使得密封板凹槽部位的厚度变小，垂直密封板容易从该处向外直接掰开、与底板及其他相邻接的垂直密封板部位脱离、掰掉，便于细胞染色和后续观察。6)上部盖板的下端面与垂直密封板上端面配合，凸起一位于垂直密封板的内侧、与垂直密封板的上端内侧配合、向下伸入垂直密封板上端面以下，通过凸起一与垂直密封板的上端内侧配合实现培养皿盖的定位，保证上部盖板能够可靠牢固地覆盖固定在下部培养皿的开口处，起到保护作用。7)在上部盖板的下端面上与垂直密封板上端面配合的位置设有多个薄的下部凸起二，通过多个薄的凸起二与垂直密封板上端面接触，使得上部盖板的下端面与垂直密封板上端面留有预定的空隙，便于培养皿体内腔与外界保持一定的空气循环接触，满足细胞培养的条件，保证细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞培养皿，包括培养皿体、培养皿盖，其特征是，在培养皿体一侧设有手柄，所述培养皿体包括底板，底板上设有若干底板凹槽，底板上部周边设有封闭的垂直密封板，所述手柄与底板连接，培养皿盖下端面与垂直密封板上端面配合。

【技术特征摘要】
1.一种细胞培养皿，包括培养皿体、培养皿盖，其特征是，在培养皿体一侧设有手柄，所述培养皿体包括底板，底板上设有若干底板凹槽，底板上部周边设有封闭的垂直密封板，所述手柄与底板连接，培养皿盖下端面与垂直密封板上端面配合。2.如权利要求1所述的细胞培养皿，其特征是，所述垂直密封板在与底板连接位置的上部外侧设有密封板凹槽，所述密封板凹槽为弧形槽或者由从上向下向内的倾斜面。3.如权利要求1所述的细胞培养皿，其特征是，所述培养皿盖包括上部盖板、与盖板连接的下部凸起一，上部盖板的下端面与垂直密封板上端面配合，所述凸起一位于垂直密封板的内侧，与垂直密封板的上端内侧配合、向下伸入垂直密封板上端面以下。4.如权利要求3所述的细胞培养皿，其特征是，所述培养皿体采用上部开口的长方体空腔结构，在远离手柄一侧的两个垂直边设有培养皿体过渡圆角，凸起一的对应位置设有突起过渡圆角。5.如权利要求1所述的细胞培养皿，其特征是，上部盖板的外缘大于垂直密封板上端面外缘。6.如权利要求3所述的细胞培养皿，其特征是，在上部盖板的下端面上与垂直密封板上端面配合的位置设有多个薄的下部凸起二。7.如权利要求1所述的细胞培养皿，其特征是，所述底板凹槽设有多个，多个底板凹槽之间通过中间隔板分开。8.如权利要求1所述的细胞培养皿，其特征是，所述培养皿采用适合细胞贴壁生长的高透明度的聚苯乙烯材料制成。9.利用权利要求1至8任...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭秀文，刘桂芬，游伟，靳青，刘倚帆，赵红波，刘晓牧，万发春，张相伦，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37