病毒疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种药用组合物或疫苗，该药用组合物或疫苗含有一种病毒蛋白分子混合物，这些病毒蛋白分子是单一病毒蛋白或其片段的序列变异体。本发明专利技术还特别涉及一种ＤＮＡ疫苗，该ＤＮＡ疫苗可编码不同结构病毒蛋白的一种混合物，该疫苗含有一种病毒ＤＮＡ分子或其片段的序列变异体的混合物，这些序列变异体可编码一种病毒蛋白或其片段的序列变异体。根据本发明专利技术的优选形式，这些病毒蛋白是人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）ＧＰ１２０蛋白的序列变异体，这些序列变异体的氨基酸序列在Ｖ２环区和／或Ｖ３环区各不相同。本发明专利技术还涉及该病毒疫苗制剂，包括中间阶段或中间构建体，以及与其相关的制备方法和应用。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种药用组合物或疫苗，该药用组合物或疫苗含有一种病毒蛋白分子混合物，这些病毒蛋白分子是单一病毒蛋白或其片段的序列变异体。本专利技术还特别涉及一种DNA疫苗，该DNA疫苗可编码不同结构病毒蛋白的一种混合物，该疫苗含有一种病毒DNA分子或其片段的序列变异体的混合物，这些序列变异体可编码一种病毒蛋白或其片段的序列变异体。根据本专利技术的优选形式，这些病毒蛋白是人免疫缺陷病毒(HIV)GP120蛋白的序列变异体，这些序列变异体的氨基酸序列在V2环和/或V3环区域各不相同，优选的是在V2及V3环区均不相同。本专利技术还涉及该病毒疫苗制剂，包括中间阶段或中间构建体，以及与其相关的制备方法和应用。在许多种病毒感染中可观测到强烈的免疫防御，尤其是HIV-1感染，免疫防御能够在数年的时间里对病毒进行控制。病毒被控制并且不产生疾病症状的时期称为(HIV)疾病的无症状期。在患病过程中会反复形成新病毒变异体。因此，病毒可能会避开已产生的人体免疫防御并反复感染新的免疫系统防御细胞(参考M.Schreiber et al.，J.Virol.68 No.6(1994)3908-3916；J.Gen.Virol.77(1996)2403-2414；Clin.Exp.Immunol.107(1997)15-20；J.Virol.71No.12(1997)9198-9205)。在先有技术中，对诸如脊髓灰质炎病毒(Horaud F et al.，Biologicals，1993，21311-316)、汉坦病毒(Ulrich R et al.，1998Vaccine 16272-280；Schmaljohn CS et al.，1992 vaccine1010-13)、拉沙病毒(Morrison HG et al.，1989 Virology171179-188；Clegg JC et al.，1987 Lancet 2186-188)、甲型肝炎病毒(Clemens et al.，1995 J.Infect.Dis.171Suppl.1p.44-p.49；Andre et al.，1990 Prog.Med.Virol.3772-95)和乙型肝炎病毒感染(McAleer et al.，1984 Nature 307178-180)以及HIV感染(Egan et al.，1995 J.Infect.Dis.1711623-1627；Kovac et al.，1993 J.Clin.Invest.92919-928)等病毒性疾病的治疗都是使用单一的未经遗传修饰的特定病毒抗原或单一的灭活病毒株来研究适当的接种策略。以HIV为例，如今已制备出两种病毒株的外包膜蛋白并用于人类疫苗实验(Zolla-Pazner et al.，J.Infect.Dis.178(1998)1502-1506)。两种GP120分子的氨基酸序列各不相同，尤其是可变区，如V3环区，的氨基酸序列。这两种病毒株正是由于V3区序列的不同而有着不同的表型特征。HIV-1 MN病毒株是一种可优先感染具有病毒共同受体CCR5的巨噬细胞与细胞的病毒变异体。与此不同的是，SF2型病毒优先在T细胞中复制，并且使用病毒共同受体CXCR4。因此，这些病毒也可被称为T细胞营养型病毒(如HIV病毒株)或巨噬细胞营养型病毒(如HIV病毒株MN)。这两种GP120变异体均已用于对黑猩猩的接种实验。实验结果表明，可诱导出一种不但具有抗MN和SF2这两种HIV病毒株的保护作用、而且能够预防其它病毒株感染甚至HIV-1患者分离株感染的免疫应答。相比之下，目前两种GP120变异体中只有一种已用于人体接种实验。MN GP120和SF2 GP120都不能提供可靠的抗病毒变异体感染的保护作用，例如由HIV-1感染者体内出现的病毒变异体(患者分离株或野生型病毒)导致的感染。J.A.Levy在ASM Press Washington，D.C.1998年出版的《HIV与AIDS发病机理》(第二版)第15章中对GP120包膜蛋白接种的有关研究状况进行了综合论述。迄今为止，先有技术中论述或检验的接种策略都具有一些缺点，特别是所用疫苗不能在病毒性疾病过程中预防新病毒的不断形成。因此，本专利技术的目的是提供一种疫苗，该疫苗尤其能够在病毒性疾病过程中预防或显著抑制新病毒变异体的形成，并且能够限制或避免病毒回避人体免疫防御而反复感染新的免疫系统防御细胞。为实现该目标，本专利技术对以下权利要求描述的主题提出建议。由此，本专利技术的主题首先是一种含有病毒蛋白分子混合物的蛋白疫苗，这些分子为单一病毒蛋白或其片段的序列变异体。根据本专利技术，蛋白的序列变异体是指含有来源于天然病毒蛋白或其部分(片段)的氨基酸序列的分子，由于在序列或其片段的任意选定位置至少有一个氨基酸被替换，因而这些变异体彼此间各不相同。优选的是序列变异体在负责产量以及结合病毒中和抗体的序列的不同位点含有数个被替换氨基酸。被替换氨基酸的数量和位置取决于在适应性细胞培养过程中及野生型HIV分离物中观测到的GP120各区域的氨基酸可变性。根据本专利技术，这些序列变异体至少在原序列或其片段的两个氨基酸位置有所不同。特别优选的是在3-8个氨基酸位置有所不同，更优选的是在8个以上的氨基酸位置有所不同，所有氨基酸都可以在这些位置出现。全部构成疫苗的序列变异体的可能种类由每个位置上可能出现的不同氨基酸的组合来决定。本专利技术特别涉及一种疫苗，该疫苗含有一种≥102种序列变异体的混合物，即102种以上不同氨基酸序列(同源物)的分子的混合物。特别优选的疫苗含有≥103种变异体，更优选的则含有≥104种变异体。在本专利技术的框架内，该疫苗除含有序列变异体之外，还可考虑含有衍生出这些序列变异体的蛋白本身。由此，本专利技术提供一种抗病毒活性成分，该抗病毒活性成分含有序列各不相同的病毒特异性蛋白或其片段。为实现这一点，可重新合成蛋白编码基因以产生新的DNA限制性酶切位点，这样可将特定区域进行替换。通过将编码所需蛋白区域的DNA片段进行化学合成，可产生该蛋白编码序列的基因库。然后将编码该蛋白的表达载体以混合物形式转染到细胞中。继而可由这些产蛋白细胞分离出不同病毒蛋白的混合物，即本专利技术的优选活性成分。当病毒性疾病为HIV时，在该疾病过程中对免疫系统的慢性感染和相关的持续损害可导致特异性病毒防御的完全丧失。能够与特定抗原结构形成强特异性结合的中和抗体是特异性病毒防御的一部分。它可将外来抗原标记并阻断其与，例如，病毒受体的相互作用。构成病毒特异性防御的是抗GP120外包膜蛋白V3环的中和抗体。这些抗V3环抗体可阻止细胞感染。在动物模型中的实验结果表明，通过将V3环特异性单克隆抗体给药可预防HIV-1感染。将这种单克隆抗体给药也可治愈已有的感染。但与实验体系相比，在HIV感染的自然过程中可观测到新病毒变异体的不断产生。而HIV-1恰恰在V3环位置的变异程度非常高，因此在单个患者体内一次就可发现数百种不同的V3环变异体。V3环是GP120的重要优势抗原域。因此，针对每种V3环都会形成一种非常特异的体液免疫应答。针对V3环产生高特异性免疫应答的结果是，抗HIV-1变异体A的V3环的中和抗体不能中和变异体B，反之亦然(Schreib本文档来自技高网...

【技术保护点】
含有病毒蛋白分子混合物的蛋白疫苗，其特征在于这些分子为单一病毒蛋白或其片段的序列变异体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M施雷贝尔，
申请(专利权)人：斯特拉思曼股份两合公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]