含卤化酶的载体和核酸片段,及卤化化合物的方法技术

本发明专利技术涉及一种卤化方法，其包含在有卤化酶参与的情况下卤化化合物，其中该卤化酶是（ａ）由ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１中详列的序列，或是一种以遗传密码的简并性为基础，从其得来的序列编码的，或是（ｂ）由一种核酸序列编码的，该核酸序列编码（ａ）的功能片段，或（ｃ）由一种序列编码的，该序列在标准条件下与（ａ）或（ｂ）杂交，或是（ｄ）由一种序列编码的，该序列具有与（ａ）下详列的序列相比，超过３０％的同一性或超过６０％的相似性。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
,及卤化化合物的方法
本专利技术涉及一种化合物的酶促卤化方法。本专利技术更进一步涉及含卤化酶或卤化酶基因的核酸片段，载体和生物。长期以来，卤化反应在化学合成中是已知的。它们用于制备大量卤化的有机化合物。这些合成反应的缺点是需要特殊的植物用于该合成。必须特别保护这些植物不受腐蚀，这是因为反应产物常常是高度腐蚀性的。在合成过程中，不仅形成所需要的产物，而且还常常形成导致污染产物的副产物。如果这些副产物在最终的产物中不被容许，则它们必须经过复杂的除去。此外，许多副产物均是有毒的。二氧芑的形成可发生在许多反应中。化学卤化的其中一个选择是酶促合成。它通常是高度选择性的，即，通常没有副产物形成。文献中公开了被称作卤过氧化物酶的酶，其在有卤素离子和过氧化氢参与的情况下卤化有机化合物。这种酶的实施例是来源于生金色链霉菌(Kren等，Liebigs Ann./Red.，1997，112379-83)，红城红球菌(Schrijver等，Appl.Environ.Microbiol.，1997，63，51911-1916)，东方拟无枝酸菌(van Wageningen等，Chem.Biol.，1998，5155-162)，烟色卡尔黑霉(Hohaus等，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，1997，36，No.182012-2013)，变青链霉菌或褐色沙雷氏菌(von Pée，K.H.，Ann.Rev.Microbiol.，1996，50375-99)的卤过氧化物酶。卤化反应到底是这些卤过氧化物酶的真实酶促反应，还是它仅仅是一个副反应还不完全清楚。该酶经常显示较低的底物和共同底物亲和力，及对于酶较低的特异性。除卤过氧化物酶之外，文献中还公开了其它卤化酶。因而，Kirner等(J.Bacteriol.，1998，Vol.180，No.7，p.1939-1943)和Hohaus等(Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，1997，36，No.18，2012-2013)描述了一种卤化酶，其将氯原子引入到色氨酸的7位中。此外，在Hammer等(Appl.Environ.Microbiol.，1997，Vol.63，No.6，2147-2154)，de Schrijver等(Appl.Environ.Microbiol.，1997，Vol.63，No.5，1911-1916)，Nowak-Thompson等(J.Bacteriol.，1999，1812166-2174)，Solenberg等(Chem.Biol.，4，1997195-202)和Dairi等(Biosci.，Biotechnol.Biochem.59，1995，1099-1106)中描述了更多的酶。在GenBank中发现了一9.9kb长的地中海拟无枝酸菌DNA的片段(Y16952)。Pelzer等描述了GenBank记录中的此DNA的两个功能。它编码加氧酶和糖基转移酶。其中没有提到其它功能。以前，还没有酶用于卤化的有机化合物的工业制备。因此本专利技术的一个目的是提供一种用于工业合成卤化的有机化合物的酶。我们已经发现，此目的可以通过本专利技术的卤化方法而达到，该方法包含在有卤化酶参与的情况下卤化化合物，其中该卤化酶是(a)由SEQ ID NO1中详列的序列，或是一种以遗传密码的简并性为基础，从其得来的序列编码的，或是(b)由一种核酸序列编码的，该核酸序列编码(a)的功能片段，或(c)由一种序列编码的，该序列在标准条件下与(a)或(b)杂交，或是(d)由一种序列编码的，该序列具有与(a)下详列的序列超过30％的同一性或超过60％的相似性(hnlichkeit)。用于本专利技术方法中的卤化酶可以按照技术人员已知的方法从生物体中分离。优选地，它可以从合成卤化化合物，例如糖肽抗生素的生物体中分离。这种生物体的实施例可以在细菌和，真核生物如藻类，像Ascophyllum或Synechocystis，地衣，真菌如卡尔黑霉属，酵母和，细菌如革兰氏阳性菌，像放线菌目，芽孢杆菌目或革兰氏阴性菌如假单胞菌属中找到。卤化酶还可以从诺卡菌形放线菌纲或链霉菌纲中分离。可以且特别优选从产生糖肽抗生素的假诺卡氏菌科(Pseudonocardiaceae)家族成员，和相关的细菌中，如假诺卡氏菌属(Pseudoncardia)，糖单孢菌属(Saccharomonospora)，糖多孢菌属(Saccharopolyspora)，无枝酸菌属(Amycolatopsis)，热密卷菌属(Thermocrispum)，Pseudoamycolata，拟孢囊菌属(Kibdelosporangium)，假诺卡氏菌属(Amycolata)，放线多孢菌属(Actiopolyspora)，放线动孢菌属(Actinokineospora)或双孢放线菌属中分离卤化酶(在下文和申请中，认为单数和复数是同义词)，所提到的实施例是下列属和种，即地中海拟诺卡氏菌(Nocardiamediterranei)，地中海拟无枝酸菌(Amycolatopsis mediter βanei)，地中海拟链霉菌(Streptomyces mediterranei)，诺卡氏菌(Nocardia Spec.)，拟无枝酸菌(Amycolatopsis spec.)，拟链霉菌(Streptomyces spec.)，东方拟诺卡氏菌(Nocardia orientalis)，东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)，东方拟链霉菌(Streptomyces orientalis)，丰加链霉菌(Streptomyces toyocaensis)或绿产色链霉菌(Streptomyces viridochromogenes)。特别优选是由东方拟无枝酸菌C329.4，A82846和ATCC19795和地中海拟无枝酸菌DSM 5908生产的。该酶还可从链霉菌属，特别是地中海拟链霉菌生物中分离。此外，卤化酶或编码卤化酶的核酸可以从红球菌属(Rhodococcus)，高温单孢菌属(Thermomonospora)，芽孢杆菌属(Bacillus)，沙雷氏菌属(Serratia)，链霉菌属(Actinosporangium)，马杜拉放线菌属(Actinomadura)，游动放线菌属(Actinoplanes)或小单孢菌属(Micromonospora)中分离出来。卤化酶的基因可以用技术人员已知的各种技术从这些生物体的基因文库中分离出来。这些技术其中之一是，例如，经由与SEQ ID NO1中详列的序列或此序列的一部分杂交，而从基因文库“钓取”基因。在教科书，例如Sambrook，J.等(1989)Molecular cloningAlaboratory manual，Cold Spring，Harbor Laboratory Press，F.M.Ausubel等(1994)Current protocols in molecularbiology，John Wiley和Sons，或D.M.Glover等，DNA Clong，Vol.1(1995)，IRL Press(ISBN 019-963476-9)中找到了适当的试验方案。所提及的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种卤化方法，其包含在有卤化酶参与的情况下卤化化合物，其中该卤化酶是（ａ）由ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１中详列的序列，或是一种以遗传密码的简并性为基础，从其得来的序列编码的，或是（ｂ）由一种核酸序列编码的，该核酸序列编码（ａ）的功能片段， 或（ｃ）由一种序列编码的，该序列在标准条件下与（ａ）或（ｂ）杂交，或是（ｄ）由一种序列编码的，该序列具有与（ａ）下详列的序列，超过３０％的同一性或超过６０％的相似性。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：S佩尔策，P胡贝尔，R修斯穆斯，J雷克滕瓦尔德，D赫克曼，W沃尔勒本，
申请(专利权)人：BASF公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]