HN基因和gD基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用技术

本发明专利技术公开了一种HN基因和gD基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用，从NDV F48E9株和ILTV WG株中分别扩增出HN基因和gD基因，将获得的目的基因克隆到穿梭载体pDC315‑MCS‑EGFP中，利用脂质体转染法将重组腺病毒穿梭质粒pDC315‑HN‑gD‑EGFP与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞，重组并包装获得含有HN基因和gD基因的重组腺病毒pBH‑HN‑gD‑EGFP；本发明专利技术用于免疫禽以预防禽新城疫和传染性喉气管炎，将此重组腺病毒免疫鸡后，鸡的抗体水平得到显著提高。

Construction of recombinant adenovirus of HN gene and gD gene and recombinant adenovirus and its application

The invention discloses a construction method and application of recombinant adenovirus and a recombinant adenovirus HN gene and gD gene from NDV, F48E9 and ILTV strains WG strain were amplified by HN gene and gD gene, the target gene was cloned into the shuttle vector pDC315 MCS EGFP, using liposome transfection the Recombinant Adenovirus Shuttle Plasmid pDC315 HN gD EGFP with adenovirus backbone pBHGlox (delta) E1,3Cre were transfected into HEK293 cells, and the recombinant package containing HN gene and gD gene recombinant adenovirus pBH HN gD EGFP; the invention is used for immunization to prevent avian Newcastle disease and avian infectious tracheitis, the recombinant adenovirus Immunized Chicken, chicken antibody level has been improved.

【技术实现步骤摘要】
HN基因和gD基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用
本专利技术属于基因生物工程领域，涉及构建重组腺病毒的方法，具体说，是一种HN基因和gD基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用。
技术介绍
新城疫(Newcastledisease，ND)是由新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，NDV)引起的一种发病率和死亡率高的急性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须法定报告的疫病，并且对发生疫情的国家和地区实行限制和贸易禁运。鸡传染性喉气管炎(Infectiouslaryngotracheitis,ILT)是由传染性喉气管炎病毒(Infectiouslaryngotracheitisvirus,ILTV)引起的鸡的一种急性呼吸道传染病，属于B类传染病。该病在世界范围内流行传播，可引起禽类发病，特别是鸡，常给养鸡业造成巨大经济损失。目前市场上的疫苗以弱毒苗和灭活苗为主，但是它们存在着免疫持续时间短且可能会诱导潜伏感染等弊端。基因工程苗安全有效，克服了弱毒苗和灭活苗的不足；此外，二联苗还可以减少对动物免疫接种时的应激并节约成本，达到一苗多防的目的。
技术实现思路
本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种HN基因和gD基因重组腺病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从NDV F48E9株和ILTV WG株中分别扩增出HN基因和gD基因；2)将获得的目的基因亚克隆到腺病毒穿梭载体质粒pDC315‑MCS‑EGFP上，获得重组穿梭载体pDC315‑HN‑gD‑EGFP；3)将重组穿梭载体pDC315‑HN‑gD‑EGFP与腺病毒大骨架质粒pBHGlox E1,3Cre共转染H EK293细胞，重组并包装获得重组腺病毒pBH‑HN‑gD‑EGFP。

【技术特征摘要】
1.一种HN基因和gD基因重组腺病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从NDVF48E9株和ILTVWG株中分别扩增出HN基因和gD基因；2)将获得的目的基因亚克隆到腺病毒穿梭载体质粒pDC315-MCS-EGFP上，获得重组穿梭载体pDC315-HN-gD-EGFP；3)将重组穿梭载体pDC315-HN-gD-EGFP与腺病毒大骨架质粒pBHGloxE1,3Cre共转染HEK293细胞，重组并包装获得重组腺病毒pBH-HN-gD-EGFP。2.根据权利要求1所述HN基因和gD基因重组腺病毒的构建方法，其特征在于，所述步骤1)为从NDVF48E9株和ILTVW...

【专利技术属性】
技术研发人员：金天明，高珂珂，张东超，李小慧，赵瑞利，林静，李昕，孟佳丽，尚翠玲，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：天津,12