用于基因的稳定的染色体多拷贝整合的方法技术

本发明专利技术解决的问题是通过同源重组将目的基因的多拷贝整合到充分限定的位点，所述位点相邻与细菌宿主菌株染色体中的条件必需基因，所述染色体中在不同位点已经包含了目的基因的至少一个拷贝。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种构建细胞的方法，所述细胞包含稳定整合到染色体不同位置的目的基因的至少两个拷贝，该方法包括以下步骤：ａ）提供包含目的基因的至少一个染色体拷贝的宿主细胞，其还包含一或多个条件性必需的染色体基因，所述基因已被改变使之不具功能性；ｂ）提 供ＤＮＡ构建体，其包含：ｉ）步骤ａ）的条件性必需基因的经改变不具功能性的拷贝；且ｉｉ）目的基因至少一个拷贝，其一端侧接ｉ），另一端侧接同源于宿主细胞ＤＮＡ序列的ＤＮＡ片段，所述ＤＮＡ序列位于邻近步骤ａ）的基因的宿主细胞染色体上；其中 在ｉ）的改变的拷贝和步骤ａ）的改变的染色体基因之间的第一次重组恢复条件性必需染色体基因的功能性并使细胞为可选的；ｃ）将所述ＤＮＡ构建体引入宿主细胞，并在需要功能性条件性必需基因的选择性条件下培养细胞；和ｄ）选择在上述步骤的选择性条件 下生长的宿主细胞；其中目的基因的至少一个拷贝整合到与步骤ａ）的基因相邻的宿主细胞染色体；并任选ｅ）重复步骤ａ）至ｄ）至少一次，每一次重复在步骤ａ）中采用不同的染色体基因。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂恩T乔根森，詹斯T安德森，迈克尔D瑞斯马森，卡斯滕奥尔森，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]