骨髓间充质干细胞分离和体外扩增培养方法技术

本发明专利技术提供了一种骨髓间充质干细胞分离和体外扩增培养方法。为了有效提高骨髓间充质干细胞的体外纯化率和扩增能力，在分离骨髓单个核细胞的基础上，采用贴壁培养原代细胞后，再行正、负向免疫分选结合的方法纯化骨髓间充质干细胞，并在随后的纯化细胞扩增培养中，建立含有人参皂甙多糖的骨髓间充质干细胞培养体系，可提高骨髓间充质干细胞的体外扩增和继代培养能力，达到建立人骨髓间充质干细胞株系的目的。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物技术方法，涉及一种骨髓间充质干细胞分离和体外扩增培养的新生物技术方法。这种方法能有效地纯化骨髓间充质干细胞和提高其体外的扩增能力。由于目前还尚未发现骨髓间充质干细胞的特异性标记分子，因此该干细胞的分离纯化采用的还是间接的方法传统的方法是采用贴附方法，即在分离骨髓单个核细胞的基础上，利用间充质干细胞的贴附性在细胞培养瓶内贴壁形成纺锤形的成纤维状细胞，并经过传代贴壁来逐步纯化间充质干细胞。这种方法简单方便，但是这种方法分离的细胞实质是多种细胞的混合物，而非克隆化的间充质干细胞。这种多细胞混合物的继代培养和扩增能力较低，难以形成真正的间充质干细胞株系。另一类方法是在分离骨髓单个核细胞的基础上，利用一定的单抗标记的免疫磁珠分离系统纯化间充质干细胞。虽然目前尚不清楚骨髓间充质干细胞的特异性标记分子，但公认为其表现为CD34-、CD14-、CD45-、SH2+、SH3+、CD29+、CD71+、CD90+、CD106+、CD120a+和CD124+。根据这些特点，也有人在培养前利用抗Stro-1、抗CD105的抗体标记免疫磁珠进行分选，这些方法有效提高了骨髓间充质干细胞的纯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种骨髓间充质干细胞分离和体外扩增培养方法，从骨髓中分离单个核细胞，先进行细胞原代贴壁培养，再依据骨髓间充质干细胞表面标记抗原对贴壁细胞进行免疫抗体分选，其特征是：进行正、负向免疫分选结合的方法，纯化骨髓间充质干细胞，获得ＣＤ１４↑［－］ＣＤ１０５↑［＋］细胞，在体外培养体系中继代扩增培养。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王金福，
申请(专利权)人：浙江大学，杭州大力神医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]