樟芝大规模液体深层发酵生产工艺制造技术

樟芝大规模液体深层发酵生产工艺。珍稀药用真菌樟芝人工培养子实体尚未成功，也难于液体发酵培养。本发明专利技术以大规模液体深层发酵生产樟芝菌丝体为目标，以山东金乡樟芝真菌为出发菌株，采用斜面菌种进行液体摇瓶培养、液体摇瓶扩大培养、一级种子培养和发酵培养，最终发酵罐体积达１０００－５０００Ｌ。利用本发酵工艺，在１５００Ｌ发酵罐中发酵４２ｈ，发酵液中菌丝体以干重计可达１－１．５％。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种樟芝大规模液体深层发酵生产工艺。 技术背景樟芝(Antrodia camphorata)是台湾一种著名的中药。野生子实体生长在台湾保护树种牛樟树树干腐朽之心材内壁，或枯死倒伏之牛樟木材阴暗潮湿之表面，很不容易被发现。樟芝在台湾有悠久的使用历史，原住民皆将樟芝视为是最珍贵的药材。野生上品在物以稀为贵的预期心理作用之下，天然樟芝的价格也日渐地水涨船高，目前被称为是全世界市场上最昂贵的野生真菌，市价往往高达每台斤新台币十多万元至数十万元不等，野生上品可达15000美元/公斤，可说是药材中的王中之王。目前，还不能人工培育樟芝子实体。在台湾，近几年已有十几家公司开发出用樟芝发酵菌丝体和发酵菌粉为主要原料的保健食品，可以调节生理功能、滋补强身、增强体力、增加免疫力、精神旺盛、促进新陈代谢、减少疲劳感。 现代研究发现，樟芝发酵产物的抗氧化能力很强。台湾学者对樟芝菌丝体水提物在体外保护正常人红血球抗氧化的能力进行了考察。由水溶性过氧化基二盐酸化2，2’-偶氮双(2-咪基丙烷)[2，2’-Azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride，AAPH]所导致的红血球氧化溶血和脂质/蛋白过氧化被樟芝菌丝体以一种时间和浓度依赖的方式抑制。樟芝菌丝体也能阻止红血球胞质中抗氧化的谷胱甘肽(GSH)和三磷酸腺苷(ATP)的损耗。而且，由AAPH导致的人内皮细胞的损害也能被樟芝菌丝体抑制。令人感兴趣的是，樟芝菌丝体展示出白血病HL-60细胞显著的细胞毒性，但对人内皮细胞没影响。这些结果表明樟芝菌丝体具有防过氧化和抗癌的成分。台湾学者也对液体深层培养的樟芝培养基干物质(DMCM)，滤出物(DMF)和菌丝体中不同溶剂提取物的生物活性物质的抗氧化能力、自由基清除能力作了研究。DMF表现出对脂质过氧化的最强抑制，该活性与浓度成函数关系。在0.2mg/mL时，其抗氧化的活性能与丁基羟基茴香醚(BHA)相同。菌丝体正己烷提取物的抗氧化能力最低，反之，其他菌丝体提取物有一些抑制脂质过氧化的活性。DMF和菌丝体水提取物(WEM)表现出显著的自由基清除活性。滤出物和菌丝体提取物的抗氧化活性与所含的多酚、总三萜和总多糖中蛋白/多糖比例有关。在不同的模型研究中发现，DMCM的抗氧化能力比DMF低，这指出DMF中主要的抗氧化成分是菌丝体的次生代谢产物。以上结果表明，DMF可被开发成化学防护剂用于治疗与自由基有关的疾病。 近年研究发现，樟芝子实体和液体深层发酵菌丝体中粗多糖具有强的抗乙肝病毒表面抗原的活性，50ug/ml多糖浓度抗乙肝病毒(HBV)表面抗原的活性强于α-干扰素1000U/ml的剂量。而樟芝子实体和某些菌株液体深层发酵菌丝体产生的多糖还具有抗乙肝病毒e抗原的活性。这是首次发现来源于食用真菌中多糖具有在细胞水平抗HBV活性。 目前，樟芝子实体的人工栽培尚未成功。在台湾省销售的多种保健食品几乎为液体发酵法生产。中国大陆有关樟芝液体发酵专利仅有一项，由台湾食品工业发展研究所申请(公开号CN1309176A)，其发酵是在摇瓶水平。台湾省2000年农委会科技计划成果报告中提到，以5升发酵罐培养，在259.5h菌丝产量为1.712g/L。目前，尚无樟芝大规模液体深层发酵工艺方面的论文和专利报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是以生产樟芝菌丝体为目标，专利技术一种廉价高效的樟芝大规模液体深层发酵工艺，为今后樟芝的大规模液体深层发酵生产打下基础。 实现本专利技术的技术方案以樟芝真菌为出发菌株，采用斜面菌种进行液体摇瓶培养、液体摇瓶扩大培养、一级种子培养和发酵培养。本菌株购自山东金乡真菌研究所。 实现本专利技术的具体步骤如下(1)取出斜面菌种接入配制的新鲜斜面培养基中，培养温度25-33℃，培养240-312小时。 (2)将步骤1中的斜面菌种转接入装有摇瓶培养基的摇瓶中，25-33℃培养，转速120-180rpm/min，培养30-48小时后进行摇瓶的扩大培养。 (3)将步骤2中的摇瓶菌种转接入装有摇瓶培养基的摇瓶再进行扩大培养，25-33℃培养，转速120-180rpm/min，培养20-28小时后接入一级种子罐进行培养，接种量为4-10％。 (4)将步骤3中的摇瓶菌种转接入一个装有种子培养基的一级种子罐中，保持罐温25-33℃，罐压0.5-0.9kPa，搅拌速率80-150rpm/min，通气量1∶0.3-0.5，发酵30-48小时，然后转接入发酵罐进行培养，接种量为4-10％。 (5)将一级种子罐中的菌种转接入一个装有发酵培养基的发酵罐中，保持罐温25-33℃，罐压0.5-0.9kPa，搅拌速率80-150rpm/min，通气量1∶0.3-0.5，发酵35-48小时。在还原糖含量降低到0.05％左右时放罐。 本专利技术中斜面培养基的配方是(g/100ml)马铃薯15-20，葡萄糖1-2，蛋白胨0.1-1，KH2PO40.1-0.5，MgSO40.01-0.1，琼脂1.5-2.5，加水定容至所需体积，pH值为5.0。 本专利技术中摇瓶培养基和摇瓶扩大培养基的配方是(g/100ml)葡萄糖2-4，蛋白胨0.5-1.5，黄豆粉0.5-2，麸皮汁1.5-2.5，KH2PO40.1-0.5，MgSO40.01-0.1，加水定容至所需体积，pH值为5.0。 本专利技术中100L发酵罐的一级种子培养基配方是(g/100ml)葡萄糖2-4，蛋白胨0.5-1.5，黄豆粉0.5-2，麸皮汁0.1-0.5，KH2PO40.1-0.5，MgSO40.05-0.15，加水定容至所需体积，pH值为5.0。 本专利技术中1500L发酵罐的发酵培养基配方是(g/100ml)葡萄糖2-6，蛋白胨0.5-1.5，黄豆粉0.5-2，麸皮汁0.3-0.8，KH2PO40.1-0.5，MgSO40.05-0.15，加水定容至所需体积，pH值为5。 本专利技术步骤2中摇瓶培养基与摇瓶容积比为1∶5，步骤3中摇瓶培养基与摇瓶容积比为1∶5。 本专利技术步骤4中一级种子罐的容积为100-300L，在该一级种子罐中装有的发酵培养基相应为50-180L；步骤5中发酵罐的容积为1000-5000L，在该发酵罐中装有的发酵培养基相应为500-3500L。 本专利技术的放罐标准是发酵液开始变得粘稠，还原糖含量降低到0.05％左右，镜检发现菌丝体开始衰老。 本专利技术的有益效果本专利技术适用于大规模液体深层发酵生产樟芝，解决了樟芝大规模生产培养放大的难题，对于樟芝今后的工业化生产和相关的应用产业的发展具有重要意义。本专利技术在发酵结束后得到的发酵产物颜色呈鲜艳的玫瑰红色，散发出诱人的香味，发酵液具有苦涩味。干燥菌丝体呈玫瑰红色。发酵菌丝体的干重为1-1.5％，发酵菌丝体中多糖含量为6-8％。本发酵菌丝体干粉的抗氧化能力很强。 具体实施方式 下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明。 实施例1在斜面培养基中接种樟芝菌丝体，培养温度28℃，培养时间264小时。将新鲜的斜面菌种接入装有100ml培养基的500ml三角瓶中，28℃摇床培养40小时，摇床转速150rpm/min。然后将所得摇瓶菌种转接入装有100ml培养基的500ml三角摇瓶中进行扩大培养，28℃摇床本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种樟芝液体深层发酵生产工艺，其特征是：以樟芝真菌为出发菌株，采用斜面菌种进行液体摇瓶培养、液体摇瓶扩大培养、一级种子培养和发酵培养。

【技术特征摘要】
1.一种樟芝液体深层发酵生产工艺，其特征是以樟芝真菌为出发菌株，采用斜面菌种进行液体摇瓶培养、液体摇瓶扩大培养、一级种子培养和发酵培养。2.根据权利要求1所述的樟芝液体深层发酵生产工艺，其特征是以购自山东金乡真菌研究所樟芝真菌为出发菌株。3.根据权利要求1所述的樟芝液体深层发酵生产工艺，其特征是所述的斜面菌种培养基组成是(g/100ml)马铃薯15-20，葡萄糖1-2，蛋白胨0.1-1，KH2PO40.1-0.5，MgSO40.01-0.1，琼脂1.5-2.5，加水定容至所需体积，pH值为5.0，斜面菌种培养温度25-33℃，培养240-312小时。4.根据权利要求1所述的樟芝液体深层发酵生产工艺，其特征是所述的摇瓶培养的培养基组成是(g/100ml)葡萄糖2-4，蛋白胨0.5-1.5，黄豆粉0.5-2，麸皮汁1.5-2.5，KH2PO40.1-0.5，MgSO40.01-0.1，加水定容至所需体积，pH值为5.0，培养条件是培养温度25-33℃，转速120-180rpm/min，培养30-48小时，然后转接入摇瓶进行扩大培养。5.根据权利要求1所述的樟芝液体深层发酵生产工艺，其特征是所述的摇瓶扩大培养的培养基组成是(g/100ml)葡萄糖2-4，蛋白胨0.5-1.5，黄豆粉0.5-2，麸皮汁1.5-2.5，KH2PO40.1-0.5，MgSO40.01-0....

【专利技术属性】
技术研发人员：敖宗华，符慧子，邹锡良，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]