一种光‑基因质粒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种光‑基因质粒及其应用，该质粒包含启动子、光感基因及可变色荧光蛋白基因。本发明专利技术使光感基因及可变色荧光蛋白基因在质粒上结合形成所述质粒，其可用于观察确切被光调控的细胞或组织的功能。表达该光‐基因质粒的细胞在光刺激下能产生生理功能变化；结合光通道上荧光变化指示作用确定被光调控的细胞。综合这些功能，该质粒能准确地反应那些被光刺激的细胞或组织功能。

A light gene plasmid and its application

【技术实现步骤摘要】
一种光-基因质粒及其应用
本专利技术涉及一种一种光-基因质粒及其应用，属于光-基因

技术介绍
“光-基因技术体系”技术(OptogeneticTechnology)是最近十年在美国和德国首先开展起来的，其是一种整合了基因工程学、电生理学、光学和电子工程技术的全新生物技术。该技术基于基因治疗的方法，利用病毒载体(通常用慢病毒或腺相关病毒)将一种从绿藻Chlamydomonasreinhardtii克隆出来的可以编码光敏感型阳离子通道蛋白的基因(ChR2)导入某一特定的细胞亚群中表达，此通道蛋白受到蓝光(472nm)刺激时，会使Na+离子进入细胞内引起胞膜去极化而兴奋细胞。此外，另有一种从Natruonobacteriumpharaonis提取出来的光调控的氯离子泵蛋白基因NpHR，其对黄光(593nm波长)敏感，将其克隆到某一细胞中表达后，在黄光刺激下该氯离子通道蛋白会使Cl-进入细胞而使胞膜复极化，从而使细胞回复静息，这样利用交替的蓝光或黄光就可以在特定细胞亚群水平上控制细胞活性。这项技术具有空间上的细胞特异性(应用特定启动子诱导相应基因在特定细胞群中表达)和时间上毫秒水平本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种光‑基因质粒，其中，该质粒包含启动子、光感基因及可变色荧光蛋白基因。

【技术特征摘要】
1.一种光-基因质粒，其中，该质粒包含启动子、光感基因及可变色荧光蛋白基因。2.根据权利要求1所述的光-基因质粒，其中，所述可变色荧光蛋白基因包括EosFP、Dendra2、Kaede或mKikGR。3.根据权利要求1或2所述的质粒，其中，所述光感基因包括ChR2、eNpHR3.0、C1V1、ChETA或ArchT。4.根据权利要求1或2所述的光-基因质粒，其中，所述启动子包括Ef1a、CaMKIIa、hSyn、CAG、Fos、PV或TH；优选地，在所述光-基因质粒中，所述启动子为hSyn，所述光感基因为eNpHR3.0，且所述可变色荧光蛋白基因为Dendra2。5.根据权利要求4所述的光-基因质粒，其中，该质粒为pAAV-hSyn-eNpHR3.0-Dendra2；优选地，该质粒中eNpHR3.0-Dendra2的基因序列如SEQIDNO:2所示；更优选地，pAAV-hSyn-eNpHR3.0-Dendra2的图谱如图2b所示。6.权利要求5所述的光-基因质粒制备方法，其中，所述方法包括联合应用MfeⅠ单酶及HindⅢ单酶将pAAV-hSyn-eNpHR3.0-EYFP质粒中的EYFP基因切下后，再在酶切质粒骨架pAAV-hSyn-eNpHR3.0上连接采用MfeⅠ单酶及HindⅢ单酶酶切SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤勇，詹阳，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44