一种定向固定蛋白A的活性载体和制备方法以及蛋白A免疫吸附材料的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种直接从细胞破碎上清液中定向固定蛋白A制备的免疫吸附材料，具体公开了制备该免疫吸附材料的活性载体，以及利用该载体制备蛋白A免疫吸附材料的方法。该活性载体以亲水性凝胶微球为基质，依次与环氧氯丙烷、天冬氨酸、环氧氯丙烷、氢氧化钠反应后得到。该活性载体上含有金属螯合基和环氧基，在一定条件下，能直接从细胞破碎上清液中定向固定带有组氨酸标签的目的蛋白质。本发明专利技术的活性载体能够将带有组氨酸标签的蛋白A从细胞破碎上清液中直接固定制备得到蛋白A免疫吸附材料，省略蛋白A的纯化过程，大大减少固定化的成本；固定条件温和，制备得到的蛋白A免疫吸附材料吸附效率高，可用于临床上免疫吸附治疗。

Active carrier and preparation method of a directional immobilized protein A and preparation of protein A immunoadsorbent

The invention discloses an immunoadsorption material prepared directly from the cell immobilized supernatant, and is directed to immobilized protein A. The active carrier for preparing the immune adsorption material is disclosed, and the method for preparing protein A immune adsorption material using the carrier is disclosed. The active carrier is based on hydrophilic gel microspheres, and then reacts with epichlorohydrin, aspartic acid, epichlorohydrin and sodium hydroxide in turn. The active carrier contains metal chelating group and epoxy group. Under certain conditions, it can directly immobilize the target protein with histidine tag from the cell breaking supernatant. The carrier of the invention can be activated with a histidine tag protein A in the supernatant was prepared by direct fixed protein A immunoadsorption materials from cells broken, the purification process of ellipsis protein A, greatly reducing the cost of fixed fixed; mild conditions, the prepared protein A immune adsorbent with high efficiency, can be used for the treatment of clinical immunoadsorption.

【技术实现步骤摘要】
一种定向固定蛋白A的活性载体和制备方法以及蛋白A免疫吸附材料的制备方法
本专利技术涉及蛋白质固定化
，尤其涉及一种定向固定蛋白A的活性载体和制备方法以及蛋白A免疫吸附材料的制备方法。
技术介绍
各种自身免疫性疾病和器官移植排斥反应都是由于人体内产生自身抗体，对抗自身组织器官或移植器官，引起组织器官的损害而导致的一系列疾病，是目前国内外医学界面临的治疗难题之一。自身免疫性疾病是由于人体免疫系统发生紊乱而导致，具有相当高的致残率或病死率，常见的有系统性红斑狼疮(SLE)、血友病、类风湿关节炎(RA)、系统性硬化(SSc)、重症肌无力(MG)、干燥综合征(SS)等。移植排斥反应是器官移植失败的主要原因，这涉及到病人机体对移植的异源器官所产生的免疫不耐受，进而促使供体特异性抗体的产生。针对这类急危重症，传统的药物和手术治疗无能为力，而免疫吸附疗法通过选择性清除患者血液中致病性抗体，具有其独特的疗效，已成为近年来国内外的推荐疗法。免疫吸附疗法利用亲和层析的原理，直接从患者血液中选择性或特异性地清除致病因子，从而达到净化血液，治疗疾病的目的。蛋白A是一种从金黄色葡萄球菌(Staphyloc本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定向固定蛋白A的活性载体，其特征在于，它具有如下的化学结构：

【技术特征摘要】
1.一种定向固定蛋白A的活性载体，其特征在于，它具有如下的化学结构：其中，代表亲水性凝胶微球。2.根据权利要求1所述的定向固定蛋白A的活性载体，其特征在于，所述金属螯合基由两个羧基和一个叔氨基组成，能螯合二价金属离子。3.根据权利要求1所述的定向固定蛋白A的活性载体，其特征在于，所述活性载体上含有20～60μmol/g的环氧基和20～60μmol/g金属螯合基。4.一种如权利要求1或2或3所述的定向固定蛋白A的活性载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：在亲水性凝胶微球上形成环氧基；S2：在步骤S1所得的产物上形成具有仲氨基的金属螯合基，该金属螯合基是由环氧基反应形成；S3：将步骤S2所得的产物置于碳酸钠溶液中，加入环氧氯丙烷，环氧氯丙烷与仲氨基反应，随后用蒸馏水冲洗、抽干；S4：将步骤S3所得的产物置于氢氧化钠溶液中反应，随后用蒸馏水冲洗获得活性载体。5.根据权利要求4所述的定向固定蛋白A的活性载体的制备方法，其特征在于，步骤S1中：将亲水性凝胶微球与2～3M的氢氧化钠溶液混合后，加入硼氢化钠和环氧氯丙烷，在20～40℃反应2～8小时后，用蒸馏水冲洗、抽干；步骤S2中：将步骤S1中所得产物加入0.2～1.5M的天冬氨酸溶液，调节pH至10～12，在40～60℃反应4～12小时后，用蒸馏水冲洗、抽干。6.根据权利要求4所述的定向固定蛋白A的活性载体的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：张旭锋，杨家梅，邓瑶，杨海艳，郭仁玲，王宇，
申请(专利权)人：云南师范大学，
类型：发明
国别省市：云南,53