槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用及其药物制造技术

本发明专利技术提供了一种槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用及其药物，涉及生物医药技术领域。本发明专利技术所述槐定碱在有效剂量内能够抑制RANKL诱导的破骨细胞的分化成熟的RANKL‑ERK‑NFAT信号通路中的ERK的磷酸化，进而抑制RANKL诱导的破骨细胞的嗜骨能力，显著降低c‑Fos、NFATc1等破骨细胞分化特异基因的表达，抑制骨吸收，促进骨形成，最终起到防治骨质疏松的作用。本发明专利技术槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用具有疗效确切、副作用小的特点，缓解了现有治疗骨丢失疾病的药物在临床应用中具有较大的不良反应的问题。

The application of Sophora japonica in the preparation of anti osteoporosis drugs and its drugs

The invention provides an application of Sophora japonicine in the preparation of anti osteoporosis drugs and a drug, which relates to the field of biological medicine. Osteoclasts of the Huai the invention of oxysophoridine could inhibit RANKL induced in the effective dose in the differentiation and maturation of RANKL ERK in NFAT signaling pathway, ERK phosphorylation, and inhibit RANKL induced osteoclast resorption capacity of, significantly reduce the expression of C Fos and NFATc1 osteoclast differentiation the specific gene, inhibit bone resorption and promote bone formation, and ultimately contributes to the prevention and treatment of osteoporosis. The application of Sophora alkaloids in the preparation of anti osteoporotic drugs has the advantages of exact curative effect and small side effects, relieving the problem of adverse reactions existing in the treatment of bone loss diseases in clinical practice.

【技术实现步骤摘要】
槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用及其药物
本专利技术涉及生物医药
，尤其是涉及一种槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用及其药物。
技术介绍
骨质疏松是一种以单位体积内骨组织量减少为特点的代谢性骨病。特别是随着女性年龄的增长，雌激素分泌的减少，骨质疏松的发病率也相应的显著提高，据统计我国45岁以上的妇女中，三分之一的人患有不同程度的骨质疏松。骨组织量减少主要由于骨质吸收增多所致。破骨细胞是骨组织成分的一种，是人体内唯一的具有骨吸收功能的细胞，破骨细胞的过多生成导致骨吸收的增强，进而引起骨丢失疾病，因此，对破骨细胞的研究是治疗骨质疏松疾病的关键。研究发现破骨细胞起源于骨髓单核-巨噬细胞谱系细胞，在体内必须依赖于一些诱因诱导分化发育为多核的成熟破骨细胞，最后被活化。目前认为最直接活化破骨细胞的内源性分子是成骨细胞或骨髓基质细胞分泌的激活核因子NFATc1等受体的配体RANKL。RANKL与前破骨细胞表面受体RANK结合，募集RANK信号传导的转接蛋白TRAF6,TRAF6通过激活细胞外调节蛋白激酶(ERK)启动下游信号通路NFATc1，c-Fos以及钙离子通道，促进破骨细胞的分化成熟。因此，该通路又称RANKL-ERK-NFAT通路。现有治疗骨丢失疾病的药物主要是激素替代疗法或骨吸收抑制剂治疗，例如双磷酸盐。但是，研究发现应用激素替代疗法，女性患乳腺癌的风险增大，同时抑制骨吸收的磷酸盐制剂在临床应用中具有较大的不良反应。因此，研究开发一种疗效确切、副作用小的防治骨丢失疾病的药物具有十分必要和迫切的要求。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用。本专利技术的第二目的在于提供一种抗骨质疏松药物，该药物由槐定碱与药学上可接受的一种或多种载体组成的组合物制备而成。本专利技术提供的槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用。进一步的，上述骨质疏松为雌激素缺乏引起的骨质疏松。进一步的，上述雌激素缺乏是由卵巢功能缺失引起的。进一步的，槐定碱抑制雌激素缺乏引起的骨转化率增强和骨质破坏。更进一步的，上述槐定碱抑制雌激素缺乏引起的骨转化率增强和骨质破坏是基于抑制破骨细胞分化基因的表达。进一步的，槐定碱抑制破骨细胞分化基因的表达为阻断RANKL-ERK-NFAT通路信号传导至细胞核。更进一步的，上述阻断RANKL-ERK-NFAT通路信号为槐定碱阻断细胞外调节蛋白激酶的启动，进而抑制通路信号传导至细胞核。进一步的，抑制表达的破骨细胞基因为NFATc1和c-Fos转录因子。本专利技术提供的一种抗骨质疏松药物，上述药物由槐定碱与药学上可接受的一种或多种载体组成的组合物制备而成。进一步的，上述药物的给药方式包括口服给药或者注射给药。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用，槐定碱能够抑制RANKL诱导的破骨细胞的分化成熟的RANKL-ERK-NFAT信号通路中的ERK的磷酸化，进而抑制RANKL诱导的破骨细胞的嗜骨能力，显著降低c-Fos、NFATc1等破骨细胞分化特异基因的表达，抑制骨吸收，促进骨形成，最终起到防治骨质疏松的作用。本专利技术提供的抗骨质疏松药物，所述药物由槐定碱与药学上可接受的一种或多种载体组成的组合物制备而成。该制备得到的药物能够有效的抑制破骨细胞的的形成，具有疗效确切、副作用小的特点，缓解了现有治疗骨丢失疾病的药物在临床应用中具有较大的不良反应的问题。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1a为本专利技术实施例2小鼠血清CTX-I含量测定结果图；图1b为本专利技术实施例2小鼠血清OCN含量测定结果图；图2a为本专利技术实施例3小鼠胫骨病理切片HE染色图；图2b为本专利技术实施例3小鼠胫骨病理切片TRAP染色图；图3为本专利技术实施例3小鼠的近端股骨微电脑断层扫描图；图4为本专利技术实施例4使用MTT实验方法评估槐定碱对小鼠骨髓巨噬细胞的细胞存活率影响；图5a为本专利技术实施例5不同浓度的槐定碱抑制RANKL诱导小鼠骨髓巨噬细胞的苏木红染色结果；图5b为本专利技术实施例5不同浓度的槐定碱抑制RANKL诱导小鼠骨髓巨噬细胞的苏木红染色结果的定量统计。图6a为本专利技术实施例5不同时间加入槐定碱抑制RANKL诱导小鼠骨髓巨噬细胞的苏木红染色结果；图6b为本专利技术实施例5不同时间加入槐定碱抑制RANKL诱导小鼠骨髓巨噬细胞的苏木红染色结果的定量统计；图7为本专利技术实施例6槐定碱抑制破骨细胞形成的转录因子c-FOS和NFATc1表达的电泳分析结果；图8为本专利技术槐定碱抑制RANKL诱导的破骨细胞的分化成熟的RANKL-ERK-NFAT信号通路的作用原理图，其中，TRAF6为募集RANK信号传导的转接蛋白；ERK为蛋白激酶；NFATc1和c-Fos为细胞核中的破骨细胞分化基因；SOP为槐定碱。具体实施方式为了更清楚地说明本专利技术，下面结合优选实施例对本专利技术做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本专利技术的保护范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用工具或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1建立卵巢切除骨质疏松模型小鼠为表明本专利技术槐定碱对骨质疏松症具有很好的治疗效果，现特选取40只4周龄大的雌性小鼠，将小鼠随机分为四组，每组10只，分别为：第一组、假手术组给药(ShamSop)；第二组、假手术组对照(ShamCn)；第三组、手术组给药(OvxSop)；第四组、手术组对照(OvxCn)。将全部40只小鼠全部用10％的水合氯醛麻醉后，沿下腹部正中线打开腹腔。其中，手术组给药(OvxSop)和手术组对照(OvxCn)完整切除双侧卵巢，而假手术组给药(ShamSop)、假手术组对照(ShamCn)不切除卵巢，暴露卵巢后缝合关闭切口。随后对小鼠在温度为(23±2)℃，12h光照/12h黑暗周期的环境下进行饲养。术后一周开始对手术组给药(OvxSop)和假手术组给药(ShamSop)进行给药，连续给药28天，给药方法为将槐定碱溶解于无菌生理盐水中腹腔注射给药，按照10mg/kg/d的剂量浓度给药，手术组对照(OvxCn)和假手术组对照(ShamCn)则给予同等剂量的生理盐水。通过实施例1建立卵巢切除骨质疏松模型小鼠，可以得到由卵巢功能缺失引起的雌激素缺乏，进而导致骨质疏松的动物实验模型。实施例2对实验小鼠进行血液样本分析将实施例1用药结束后的小鼠通过眼球后取血，随后提取小鼠血液中的血清，对小鼠的血清进行样本分析。首先，采集小鼠血清，随后使用酶联免疫吸附法对老鼠血清中CTX-I(破骨细胞标志蛋白)和OCN(成骨细胞标志蛋白)进行测定，测定结果我们可以发现手术组对照(OvxCn)，即切除双侧卵巢后，没有进行槐定碱给药的实验组，该手术组对照(OvxCn)的破骨细胞标志蛋白CTX-I的含量明显高于其他三组(图1a)，而各组之间成骨细胞标志蛋白OCN的含本文档来自技高网...

【技术保护点】
槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用。2.根据权利要求1所述槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用，其特征在于，所述骨质疏松为雌激素缺乏引起的骨质疏松。3.根据权利要求2所述槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用，其特征在于，所述雌激素缺乏是由卵巢功能缺失引起的。4.根据权利要求2所述槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用，其特征在于，所述雌激素缺乏引起的骨质疏松为骨转化率增强和骨质破坏。5.根据权利要求4所述槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用，其特征在于，所述槐定碱抑制雌激素缺乏引起的骨转化率增强和骨质破坏是基于槐定碱抑制破骨细胞分化基因的表达。6.根据权利要求5所述的槐定碱在制备抗骨质疏松药物中的应用，其特征在于，所述槐定碱抑制破骨细胞分...

【专利技术属性】
技术研发人员：江磊，陶燕铎，邵赟，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：青海,63