成年人骨髓间充质干细胞体外扩增和定向诱导分化为心肌样细胞的方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种将人骨髓间充质干细胞（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ）大量扩增后体外定向诱导分化为心肌样细胞的方法。为实现上述目的，本发明专利技术采用以下技术方案：１）利用ＭＳＣｓ的生物学特性，采用密度梯度离心法分离富集人ＭＳＣｓ，利用干细胞的自我更新和增殖特性对干细胞进行扩增，从而达到获得大量干细胞的目的。２）分离出的细胞在体外进行定向诱导分化的方案，其特征在于特定培养代数（第２－６，１１代细胞）进行诱导，以特定的化学诱导剂５－氮胞苷（５－ＡＺＡ），特定浓度（５－１０μＭ）进行定向诱导；３）分离出的细胞在体外进行定向诱导分化的方案，其特征还在于ｂＦＧＦ促细胞增殖及促进肌细胞表型表达功能与５－ＡＺＡ的去甲基化作用结合，更有助于人ＭＳＣｓ向成心肌细胞定向分化。本发明专利技术提供了心肌细胞损伤缺失后的补充来源，为干细胞移植替代临床治疗心肌梗死及晚期心功能不全等奠定了基础，并为心肌梗死及晚期心功能不全等心肌疾病的药物筛选提供了一个新的模型。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种利用骨髓间充质干细胞的生物学特性，分离扩增成人骨髓间充质干细胞，加入一定浓度化学诱导剂，体外定向诱导分化为心肌样细胞的方法。
技术介绍
冠心病心肌梗死及心力衰竭是严重影响人民生活质量和寿命的主要疾病之一。研究资料显示，成熟的心肌细胞缺乏再生能力，心肌梗死(MI)发生后，梗死区心肌只能通过纤维组织增生，由无收缩功能的疤痕组织代替，导致心功能下降。临床上缺乏针对梗死心肌再生、重建的根本性治疗方法，而细胞替代治疗应运而生成为一个理想的治疗策略。骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)，是在骨髓中的一种类似成纤维细胞的一类细胞，具有多方向分化潜能，可以向骨组织、软骨组织、皮肤、造血干细胞支持介质、骨骼肌细胞及心肌细胞转化。自体骨髓间充质干细胞还具有取材方便、无免疫原性、具有多向分化潜能、合乎伦理学要求并且无致瘤性，具有其它干细胞不可比拟的优势，因此，探讨hMSCs体外大量扩增及向心肌细胞诱导分化条件将对损伤心肌的修复治疗具有深远意义。在研究MSCs向心肌细胞分化机制中，目前的诱导方法主要包括化学诱导和组织微环境诱导。其中化学诱导剂以5-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离扩增培养成年人骨髓间充质干细胞（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ）的方法，其特征在于利用干细胞生理特性，采用ＤＭＥＭ－Ｆ１２＋１０％胎牛血清作为基本培养基，通过及时、反复传代对人ＭＳＣｓ进行纯化和扩增培养，从而获得高纯度大量ＭＳＣｓ的目的。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：裴雪涛，牛丽丽，曹丰，贾国良，祝善俊，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]