蓝狐精液稀释液制造技术

本发明专利技术涉及一种蓝狐精液稀释液，属于动物繁殖技术领域。由Ｎ－乙酰基－Ｄ－葡萄糖胺０．０５～０．１克，果糖６．５０～７．５０克，柠檬酸钠０．６０～１．５０克，三羟甲基胺基甲烷１．００～１．９０克，缓冲剂１．３０～３．５０克，杀菌剂１０００ＵＩ／毫升，蒸馏水加至１００毫升配制而成，稀释液ｐＨ值为６．２０～６．８０，渗透压为３００－３５０ｍＯｓｍｏ／Ｌ。本发明专利技术的稀释液能够有效延长常温条件下蓝狐精子的存活时间，提高蓝狐冻融精子的质量，提高人工授精的受孕率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种蓝狐精液稀释液，用于饲养蓝狐的人工授精，属于动物繁殖

技术介绍
蓝狐(Alopex lagopus)又名北极狐，属于珍贵的毛皮兽，其皮张是比较流行的裘皮原料。目前国内华北、东北地区已经广泛开展了蓝狐的人工养殖，现有种狐存栏量近150万只，已成为当地农民脱贫致富的好项目。然而在蓝狐长期养殖过程中，由于饲料营养、疾病防治等条件的限制，特别是近亲繁殖的泛滥，直接导致了我国人工饲养的蓝狐品种退化，皮张质量低劣，饲养回报率低，逐渐在国际毛皮市场上失去了竞争力，给养狐人造成了巨大的经济损失。同我国养殖的蓝狐相比，芬兰蓝狐皮张大、质量优，经济价值高。为此我国自96年以来陆续从芬兰进口大体型蓝狐千余只，通过人工授精技术改良国内原有自繁蓝狐品种，已产生了良好的经济效益。人工授精繁殖技术包括利用鲜精液稀释后输精和冻精解冻后输精两种方式，其中涉及到的关键性技术就是稀释液的研制。稀释液质量的优劣将直接影响蓝狐人工授精繁殖的成败。研究表明，蓝狐精子与其它犬科动物的精子类似，其在冻融过程中对低温损伤的抗性较弱，冻融后精子活力下降，人工授精的受孕率及胎仔数均低于自然繁殖(Farstad，W.等，1996，Animal Reproduction Science.42251～260.)。因此，如何长期低温保存优质蓝狐精液并充分利用优良种源是目前本领域亟待解决的问题。当前蓝狐养殖中普遍采用的另一种繁殖方法是对鲜精液稀释后进行人工授精。常用的稀释液配方有配方一氨基乙酸(1.82g)、柠檬酸钠(0.72g)、葡萄糖(6.80g)卵黄(5.00ml)青霉素(1000单位/ml)蒸馏水(97ml)。用此配方稀释蓝狐鲜精液，在22℃条件下蓝狐精子存活时间为15小时；制作冻精时，冻融精子活力为0.5，利用冻精人工输精的受孕率为90.7％(郭永佳等，1996，《养狐使用新技术》，金盾出版社)。配方二蔗糖(11g)、甘油(6mL)、卵黄(16mL)、蒸馏水(100mL)、青霉素(5万IU)。用此配方稀释蓝狐鲜精液，在7℃条件下蓝狐精子存活时间为42小时，22℃条件下蓝狐精子存活时间为18小时；制作冻精时，冻融精子活力为0.5(许加成等，2000，经济动物学报，4(2)8-11)。由于上述两种稀释液中都含有卵黄，而卵黄内易携带致病菌，所以在进行人工授精繁殖时常常会引起母狐子宫的继发感染，导致受孕率及产仔率的降低。N-乙酰基-D-葡萄糖胺(N-acetyl-D-glucosamine)是几丁质的主要成分，存在于昆虫和甲壳动物的外骨骼中，属于多糖同聚物，在细胞外表层、细胞间隙及结缔组织形成时提供主要的结构成分，使动植物组织有弹性和韧性。Breborowicz等报道N-乙酰基-D-葡萄糖胺通过人体腹膜细胞和成纤维细胞能有效激活体内葡萄胺聚糖的合成(Breborowicz等，1998，Adv.Perit.Dial.14，31-35.)。另据报道，N-乙酰基-D-葡萄糖胺已成功应用于猪精液冷冻稀释液中(Yi等，2002，AnimalReproduction Science.74，187-194.)，但关于N-乙酰基-D-葡萄糖胺在蓝狐精液稀释液方面的研究目前还没有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种蓝狐精液稀释液，使之能延长常温条件下蓝狐精子的存活时间，提高人工授精的受孕率。为实现这样的目的，本专利技术的蓝狐精液稀释液采用了细胞培养液成分N-乙酰基-D-葡萄糖胺，同时添加果糖、三羟甲基胺基甲烷(Tris)、柠檬酸钠、杀菌剂及缓冲剂等各种成分，用蒸馏水配制而成。本专利技术配制的蓝狐精液稀释液具体包含如下成分N-乙酰基-D-葡萄糖胺 0.05～0.1克果糖 6.50～7.50克柠檬酸钠 0.60～1.50克三羟甲基胺基甲烷 1.00～1.90克缓冲剂 1.30～3.50克杀菌剂 1000UI/毫升蒸馏水加至100毫升。优选的稀释液含有如下成分N-乙酰基-D-葡萄糖胺 0.07克果糖 7.15克柠檬酸钠 1.25克三羟甲基胺基甲烷 1.68克缓冲剂1.95克杀菌剂1000UI/毫升蒸馏水加至100毫升。本专利技术的杀菌剂可以采用青霉素或者庆大霉素。本专利技术采用的缓冲剂包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二盐、磷酸二氢盐。本专利技术的稀释液可按本领域的常规方法配制，按所述含量分别加入上述成分，再加蒸馏水，配成100毫升溶液即可。配制成的稀释液pH值为6.20～6.80，渗透压为300-350mOsmo/L，按优选配方配制的稀释液pH值为6.25，渗透压为320mOsmo/L，为蓝狐精子存活提供最佳基质条件。本专利技术的蓝狐精液稀释液中的果糖成分为精子在体外代谢的能量来源，柠檬酸钠可维持稀释液环境与精子内环境的渗透压平衡。此外，在本专利技术的稀释液中还加入青霉素等杀菌剂，磷酸氢二钠等缓冲剂，还可以加入甘油、乙二醇等保护剂，提高稀释液的低温保存效果。本专利技术使用由N-乙酰基-D-葡萄糖胺等多种成分组成的稀释液，稀释蓝狐鲜精液以及进行细管冻精试验，并用稀释后的鲜精液及冻融精子进行人工授精，研究该稀释液对蓝狐精子存活时间及冻融精子质量的影响，结果表明由N-乙酰基-D-葡萄糖胺等多种成分组成的稀释液，无论是在稀释蓝狐鲜精液还是在冷冻精子时，均能有效延长蓝狐精子的存活时间、保护冻融精子膜结构的完整性，表现出了良好的精子保护作用和防冻效果。与现有技术相比，本专利技术的稀释液效果显著，不仅能够有效延长常温条件下蓝狐精子的存活时间，提高蓝狐冻融精子的质量，提高人工授精的受孕率，而且稀释液中不含卵黄成分，避免了由于常规稀释液中的卵黄易携带病原体所导致的人工授精继发感染，同时配制简单，取材容易，成本价格低廉，易于推广。本专利技术的蓝狐精液稀释液既适用于鲜精稀释后人工输精繁殖，也适用于蓝狐细管冻精人工输精繁殖以及蓝狐精液稀释后的短期保存和短途运输后输精，它可明显提高蓝狐精子的生存指数，保持其授精活力。具体实施例方式以下通过具体的实施例对本专利技术的技术方案作进一步描述。以下实施例的作用应被理解为是对本专利技术的诠释而并非对本专利技术的任何方式的限制。实施例1(稀释液1)先称取0.07g N-乙酰基-D-葡萄糖胺，溶于5ml蒸馏水中，使其完全溶解。称取7.15g果糖溶于20ml蒸馏水中，待完全溶解后分别加入1.68g三羟甲基胺基甲烷、1.25g柠檬酸钠、2.25g磷酸氢二钠，按上述顺序逐一加入，添加时待先加入的试剂完全溶解后再加入后一种，溶解后把两种制剂相混合，然后加入10万单位青霉素，最后蒸馏水定容100ml，定容后pH值为6.25，渗透压为340mOsmo/L，放入5℃冰箱保存。所有制备过程均在无菌条件下进行。该配方对蓝狐精液超低温冷冻保存效果极佳。使用时按1∶2比例与蓝狐精液相混合，同时要保持稀释液的温度与待稀释精液温度相同。使用按实施例1方法制备的稀释液按1∶2比例稀释蓝狐精液，检测7℃、22℃精子存活时间、冻融精子活力(采用相差显微镜检测精子活力)、冻融精子顶体完整率(CTC-Hoechst 33258活体荧光染料联合染色法检测精子顶体完整率)、鲜精稀释后受孕率以及冻精稀释后受孕率，结果表明在22℃下蓝狐精子能够存活25小时，利用该稀释液进行鲜精液稀本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蓝狐精液稀释液，其特征在于由Ｎ－乙酰基－Ｄ－葡萄糖胺０．０５～０．１克，果糖６．５０～７．５０克，柠檬酸钠０．６０～１．５０克，三羟甲基胺基甲烷１．００～１．９０克，缓冲剂１．３０～３．５０克，杀菌剂１０００ＵＩ／毫升，蒸馏水加至１００毫升配制而成，稀释液ｐＨ值为６．２０～６．８０，渗透压为３００～３５０ｍＯｓｍｏ／Ｌ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李新红，华修国，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]