细胞制造技术

本发明专利技术涉及细胞，其包含嵌合抗原受体(CAR)和信号传导修饰蛋白，所述信号传导修饰蛋白选自以下之一：(i)截短的蛋白质，其包含来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质的SH2结构域，但缺少激酶结构域；(ii)截短的蛋白质，其包含来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质的SH2结构域，但缺少磷酸酶结构域；(iii)融合蛋白质，其包含(a)来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质的SH2结构域，或来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质的SH2结构域；和(ii)异源结构域。

Cells

The present invention relates to a cell, comprising a chimeric antigen receptor (CAR) and signal transduction protein modification, the signal transduction of modified proteins from one of the following: (I) the truncated protein, which contains from the immune receptor tyrosine activation motif based on phosphorylation of SH2 protein (ITAM) domain combination, but the lack of the kinase domain; (II) truncated proteins, including from inhibitory immunoreceptor tyrosine based motifs and phosphorylation (ITIM) protein SH2 binding domain, but the lack of phosphatase domain; (III) fusion protein, which contains (a) from immunoreceptor tyrosine based activation based on the sequence and phosphorylation (ITAM) protein SH2 binding domain, or from the inhibitory immunoreceptor tyrosine based motifs and phosphorylation (ITIM) protein SH2 binding domain; and (II) heterologous domain.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞专利
本专利技术涉及实现信号传导通路的融合蛋白质和截短的蛋白质，所述通路在操纵或调节免疫细胞激活之后得以传播。专利技术背景用自体T细胞的过继性免疫疗法涉及从患者中分离T细胞，然后进行它们的离体刺激，修饰和/或扩增以产生显示抗肿瘤特异性的T细胞群体。一旦重新输注到患者中，这些细胞能够识别肿瘤表达的抗原并介导肿瘤排斥。这种方法已经在不同设置中的大量的试验中显示出具有成为强力的，有效的和长期的癌症治疗的潜力。例如，可以通过离体扩增的EBV特异性T细胞有效治疗EBV驱动的肿瘤，如实体器官移植后的淋巴组织增生性疾病。非病毒性恶性肿瘤的类似疗法涉及肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)，其分离自切除的肿瘤片段且然后经受使用自体肿瘤样品的刺激和扩增。然后将显示肿瘤反应性的扩增的T细胞培养物重新输注到患者中。并非用重复暴露至抗原来选择和改善T细胞特异性，可以通过基因修饰和导入肿瘤特异性T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)来赋予T细胞期望的抗肿瘤特异性。离体扩增这些细胞以生产足够数量的细胞来实现患者内有意义的临床反应。但是，上面详述的方法有局限性。例如由于信号传导不足、缺少IL2或分化，过继性转染的T细胞可以表现出有限的体内存留和扩增。作为进一步的例子，过继性转染的T细胞可能会屈服于肿瘤微环境内的抑制性刺激。例如，它们可能会变得耗竭，由于过度激活而经历激活诱导的细胞死亡，或者可能导致靶向肿瘤外效应(on-targetoff-tumoureffects)。激活治疗性抗肿瘤免疫的另一种有前景的方法是阻断免疫检查点。免疫检查点是指免疫系统的各种抑制途径，其对于维持自身耐受性和调节外周组织中生理性免疫应答的持续时间和幅度是重要的。已知肿瘤利用某些免疫检查点途径作为免疫抗性，特别是针对肿瘤抗原特异性的T细胞免疫抗性的主要机制。许多免疫检查点由配体-受体相互作用启动，这意味着它们可被抗体阻断或被重组形式的配体或受体调节。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)抗体是获得美国食品和药物管理局(FDA)批准的首个该类别的免疫治疗剂。最近，已经开发了另外的免疫检查点蛋白质的阻断剂，例如程序性细胞死亡蛋白1(PD1)，并显示出增强抗肿瘤免疫。使用免疫检查点抑制剂的一个问题是由众多配体：受体相互作用触发众多抑制途径。使用抗体或重组形式的配体/受体将仅阻断一种此类的抑制性途径，留下肿瘤可以使用其他分子来补偿特定的免疫检查点阻断的可能性。专利技术概述本专利技术人已经开发了用于调节和/或操纵免疫细胞(例如T细胞和自然杀伤(NK)细胞)中的信号传导途径的系统。通过蛋白质的可逆的翻译后修饰来起始和控制细胞内信号传导途径。本专利技术人已经确定了可以通过包含来自直接T细胞信号传导蛋白(immediateT-cellsignaltransductionproteins)的SH2结构域的融合蛋白质或截短的蛋白质来调节和/或操纵T细胞中激活和抑制性信号传导。换而言之，可以通过包含来自能够结合磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)或磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)的蛋白质的SH2结构域的融合蛋白质或截短的蛋白质来激活或抑制T细胞中的信号传导通路。因此，在第一方面，本专利技术提供了细胞，其包含嵌合抗原受体(CAR)和信号传导修饰蛋白，所述信号传导修饰蛋白选自以下之一：(i)截短的蛋白质，其包含SH2结构域，但缺少激酶结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质；(ii)截短的蛋白质，其包含SH2结构域，但缺少磷酸酶结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质；(iii)融合蛋白质，其包含(a)含来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质的SH2结构域，或来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质的SH2结构域；和(ii)异源结构域。信号传导修饰蛋白可以是截短的蛋白质，其包含ZAP70SH2结构域但缺少ZAP70激酶结构域。信号传导修饰蛋白可以是截短的蛋白质，其包含PTPN6SH2但缺少PTPN6磷酸酶结构域。信号传导修饰蛋白可以是截短的蛋白质，其包含SHP-2SH2结构域但缺少SHP-2磷酸酶结构域。信号传导修饰蛋白可以是融合蛋白质，其包含(i)SH2结构域；和(ii)磷酸酶结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质。融合蛋白质例如可以包含ZAP70SH2结构域、PTPN6或SHP-2磷酸酶结构域。信号传导修饰蛋白可以是融合蛋白质，其包含(i)SH2结构域；和(ii)激酶结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质。融合蛋白质可以包含来自PTPN6或SHP-2的SH2结构域。融合蛋白质可以包含Zap70激酶结构域。融合蛋白质可以包含AKT或JAK激酶结构域。信号传导修饰蛋白可以是融合蛋白质，其包含(i)来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质的SH2结构域，或来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质的SH2结构域；和(ii)异源信号传导结构域。融合蛋白质可以包括来自ZAP70、PTPN6或SHP-2的SH2结构域。异源信号传导结构域可以来自通常不被含有ITAM或ITIM的受体激活的信号传导分子。异源信号传导结构域可以是共刺激性结构域。在该方面，融合蛋白质可以包含CD28、OX40或41BB共刺激性结构域异源信号传导结构域可以是抑制性结构域。在该方面，抑制性结构域可以是或包含CD148或CD45的胞内域(endodomain)。或者，异源信号传导结构域是或包含ICOS、CD27、BTLA、CD30、GITR或HVEM的胞内域。信号传导修饰蛋白可以是融合蛋白质，其包含(i)SH2结构域；和(ii)含有ITAM的结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质。融合蛋白质包含ZAP70SH2结构域。含有ITAM的结构域是或包含CD3-Zeta的胞内域。信号传导修饰蛋白可以是融合蛋白质，其包含(i)SH2结构域；和(ii)含有ITIM的结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质。融合蛋白质可以包含来自PTPN6或SHP-2的SH2结构域。含有ITIM的结构域可以是或包含来自PD1、PDCD1、BTLA4、LILRB1、LAIR1、CTLA4、KIR2DL1、KIR2DL4、KIR2DL5、KIR3DL1或KIR3DL3的胞内域。信号传导修饰蛋白可以是融合蛋白质，其包含(i)来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质的SH2结构域，或来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质的SH2结构域；和(ii)蛋白酶结构域。融合蛋白质包含来自ZAP70、PTPN6或SHP-2的SH2结构域。蛋白酶结构域是或包含烟草蚀刻病毒蛋白酶(TeV)。细胞还可以包含具有蛋白酶切割位点的膜栓系转录因子(membrane-tetheredtranscript本文档来自技高网...

【技术保护点】
细胞，其包含嵌合抗原受体(CAR)和信号传导修饰蛋白，所述信号传导修饰蛋白选自以下之一：(i)截短的蛋白质，其包含SH2结构域，但缺少激酶结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质；(ii)截短的蛋白质，其包含SH2结构域，但缺少磷酸酶结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质；(iii)融合蛋白质，其包含(a)SH2结构域；和(ii)异源结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质，或来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.01 GB 1509413.91.细胞，其包含嵌合抗原受体(CAR)和信号传导修饰蛋白，所述信号传导修饰蛋白选自以下之一：(i)截短的蛋白质，其包含SH2结构域，但缺少激酶结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质；(ii)截短的蛋白质，其包含SH2结构域，但缺少磷酸酶结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质；(iii)融合蛋白质，其包含(a)SH2结构域；和(ii)异源结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质，或来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质。2.根据权利要求1的细胞，其中所述信号传导修饰蛋白是包含ZAP70SH2结构域但缺少ZAP70激酶结构域的截短的蛋白质。3.根据权利要求1的细胞，其中所述信号传导修饰蛋白是包含PTPN6SH2但缺少PTPN6磷酸酶结构域的截短的蛋白质。4.根据权利要求1的细胞，其中所述信号传导修饰蛋白是包含SHP-2SH2结构域但缺少SHP-2磷酸酶结构域的截短的蛋白质。5.根据权利要求1的细胞，其中所述信号传导修饰蛋白是融合蛋白质，该融合蛋白质包含(i)SH2结构域；和(ii)磷酸酶结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质。6.根据权利要求5的细胞，其中所述融合蛋白质包含ZAP70SH2结构域。7.根据权利要求5或6的细胞，其中所述融合蛋白质包含PTPN6或SHP-2磷酸酶结构域。8.根据权利要求1的细胞，其中所述信号传导修饰蛋白是融合蛋白质，该融合蛋白质包含(i)来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质的SH2结构域；和(ii)激酶结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质。9.根据权利要求8的细胞，其中所述融合蛋白质包含来自PTPN6或SHP-2的SH2结构域。10.根据权利要求8或9的细胞，其中所述融合蛋白质包含Zap70激酶结构域。11.根据权利要求8或9的细胞，其中所述融合蛋白质包含AKT或JAK激酶结构域。12.根据权利要求1的细胞，其中所述信号传导修饰蛋白是融合蛋白质，该融合蛋白质包含(i)SH2结构域；和(ii)异源信号传导结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质，或来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质。13.根据权利要求12的细胞，其中所述融合蛋白质包含来自ZAP70、PTPN6或SHP-2的SH2结构域。14.根据权利要求12或13的细胞，其中所述异源信号传导结构域来自通常不被含有ITAM或ITIM的受体激活的信号传导分子。15.根据权利要求12、13或14的细胞，其中所述异源信号传导结构域是共刺激性结构域。16.根据权利要求15的细胞，其中所述融合蛋白质包含CD28、OX40或41BB共刺激性结构域。17.根据权利要求12、13或14的细胞，其中所述异源信号传导结构域是抑制性结构域。18.根据权利要求17的细胞，其中所述抑制性结构域包含CD148或CD45的胞内域(endodomain)。19.根据权利要求17的细胞，其中所述异源信号传导结构域是或包含ICOS、CD27、BTLA、CD30、GITR或HVEM的胞内域。20.根据权利要求1的细胞，其中所述信号传导修饰蛋白是融合蛋白质，该融合蛋白质包含(i)SH2结构域；和(ii)含有ITAM的结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)结合的蛋白质。21.根据权利要求20的细胞，其中所述融合蛋白质包含ZAP70SH2结构域。22.根据权利要求20或21的细胞，其中所述含有ITAM的结构域是或包含CD3-Zeta的胞内域。23.根据权利要求1的细胞，其中所述信号传导修饰蛋白是融合蛋白质，该融合蛋白质包含(i)SH2结构域；和(ii)含有ITIM的结构域，所述SH2结构域来自与磷酸化的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)结合的蛋白质。24.根据权利要求23的细胞，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：M普莱，S科多巴，S托马斯，K孔，
申请(专利权)人：UCL商务股份有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB