合成肽及其用于预防和治疗癌症侵袭和转移的用途制造技术

本发明专利技术涉及本发明专利技术的合成肽，包含相应于基质金属蛋白酶（ＭＭＰ－２）的８５－９２氨基酸的ＰＲＫＰＫＷＤＫ（ＳＥＱ　　ＩＤ：２）肽，及ＳＥＱ　　ＩＤ：２的片段、类似物和同源物。本发明专利技术还涉及这种肽作为人癌症侵袭和转移的抑制物的用途，并进一步涉及在预防和治疗癌症和其它与ＭＭＰ降解胞外基质有关的病理状况中的治疗应用。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及表现出对癌症侵袭和转移的抑制活性的合成肽。本专利技术的肽包含相应于基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的85-92氨基酸的PRKPKWDK(SEQ ID2)肽，以及SEQ ID2的片段、类似物和同源物。本专利技术还涉及这种肽作为人癌症侵袭和转移的抑制物的用途以及在预防和治疗癌症及其它与MMP降解胞外基质相关的病理状况中的治疗应用。
技术介绍
多种病理状况包括肿瘤性疾病与基质金属蛋白酶(MMP)活性增加相关。MMP是一组丝氨酸蛋白酶，其能降解胞外基质(ECM)。MMP以其酶原形式被分泌在胞外基质中。经活化，MMP酶变成有活性并消化ECM，该过程被显示出在癌症转移中起主要作用。它们是MMP家族中的至少一些蛋白酶成员，并且包括MMP-1，MMP-2，MMP-3，MMP-8，MMP-9和MMP-13。在癌症中，MMP-2参与原发肿瘤生长以及肿瘤转移。这种特定的MMP能消化胶原和其它胞外基质(ECM)蛋白，作为癌症扩散以发生侵袭和转移的先决条件。尽管针对设计和测试抗癌剂进行了大量努力，持续需要一种可有效阻断MMP介导的对ECM的消化的无毒治疗剂，从而减少癌症和其它疾病的扩散。专利技术概述本专利技术涉及可有效阻断癌细胞侵袭的合成肽。这些物质及其抗体的益处是在用于阻断癌症侵袭和转移的临床应用中的效用。本专利技术的一个目的是提供有效阻断癌症侵袭和癌症转移的合成寡肽，其具有与基质金属蛋白酶2序列的特定氨基酸序列(85-92)类似的氨基酸序列。本专利技术的一个目的是提供用于阻断癌症侵袭和转移的合成肽，其具有氨基酸序列PRKPKWEDK。本专利技术的另一个目的是采用如本申请所公开的合成肽来预防和治疗癌症疾病的方法。该实施方案的另一方面是将有效量的合成肽用于实现对癌症侵袭和转移的阻断。本专利技术的另一目的提供了具有PRKPKWDK(SEQ.ID.No.2)的寡肽。优选地，该寡肽为大约6-大约20个残基。最优选地，该寡肽为大约8-大约10个残基。优选地，合成肽的浓度范围从1μM至500μM。最优选地，合成肽的浓度范围从50μM至200μM。本专利技术的另一个目的是包括在药物组合物中的免疫原性寡肽，所述药物组合物包含可药用载体和所述寡肽。该寡肽可用作疫苗。包含寡肽的药物组合物可用于诱导针对包含具有寡肽序列(例如SEQ.ID.2)的表位的蛋白的免疫应答。本专利技术的另一个目的是所述组合物和方法在体内和体外实现。本专利技术提供了具有与人MMP-2类似的氨基酸序列的合成寡肽。本专利技术还提供了通过省略N-末端的一个或多个氨基酸残基对阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽进行的修饰。本专利技术提供了通过省略C-末端的一个或多个氨基酸残基对阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽进行的修饰。本专利技术提供了通过省略N-末端和C-末端的一个或多个氨基酸残基对阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽进行的修饰。本专利技术提供了通过置换在给定的序列之中的一个或多个氨基酸残基而不考虑置换残基的电荷和极性，对阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽进行的修饰。本专利技术提供了通过用具有相似的电荷和/或极性的氨基酸残基置换在给定的序列之中的一个或多个氨基酸残基，对阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽进行的修饰。本专利技术提供了通过省略在给定的序列之中的一个或多个氨基酸残基对阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽进行的修饰。本专利技术提供了通过两种或多种所述修饰，对阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽进行的修饰。本专利技术提供了通过重复寡肽序列一次或多次，它们中的每一个共价结合至一个或多个寡肽重复，而对阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽进行的修饰。本专利技术的另一个目的是使用合成肽作为免疫原来生成抗体，从而使得这种生成的抗体可有效阻断癌症侵袭和转移。本专利技术提供了一种或多种所述寡肽通过静脉内应用或以另一种治疗上可接受的方式直接地和竞争性地减弱或阻断MMP-2的代谢作用或相互作用的预防或治疗用途。本专利技术提供了一种或多种所述寡肽间接地减弱或阻断MMP的代谢作用或相互作用的预防或治疗用途，通过皮下应用或以另一种可接受的方式将它们作为疫苗施用以刺激特异性的免疫应答，其可部分或完全阻断MMP5的代谢相互作用。优选的实施方案包括MMP-2。本专利技术提供了一种或多种所述寡肽的预防和治疗用途，其中寡肽偶联至半抗原以增强免疫应答从而增加治疗效力。本专利技术提供了一种或多种所述寡肽的预防或治疗用途，其功能作为反馈调节物来特异性地阻止或降低MMP-2蛋白在细胞水平的合成率。本专利技术提供了一种或多种可阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽，作为疫苗以产生特异性抗体，用于诊断涉及MMP-2的疾病，或临床监测该疾病的进展或消退。本专利技术提供了一种或多种阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽用于预防或治疗癌症的用途。本专利技术提供了一种或多种阻断癌细胞侵袭和转移的寡肽的用途，其中这些寡肽可作为疫苗，作为注射剂、输液、吸入剂、栓剂或其它可药用载体和/或递送方式施用于患者。附图简述附图说明图1描述了MMP2酶的氨基酸序列。所选择用于抑制活性研究的氨基酸序列被框起来以易于识别。由其他人(Loitta和同事)显示出抑制MMP2活性的氨基酸序列TMRKPRCGNPDVAN(也被框起来)用作参照。图2描述了测试的多种寡肽的对比抑制作用。使用Matrigel试验，对于人黑素瘤癌细胞A2058，寡肽PRKPKWDK高度有效地阻断癌细胞侵袭。图3描述了使用Matrigel试验，对于人黑素瘤癌细胞A2058，寡肽PRKPKWDK在阻断癌细胞侵袭方面的抑制作用。图4描述了使用Matrigel试验，对于人乳腺癌细胞MCF7，寡肽PRKPKWDK在阻断癌细胞侵袭方面的抑制作用。专利技术详述定义如本文所用，术语“肽”指包含两个或多个通过肽键共价连接的氨基酸的有机化合物；肽可以是二肽(其含有两个氨基酸残基)、三肽(三个氨基酸等)。如本文所用，术语“寡肽”指含有通常少于30个残基长度的肽。寡肽的长度对于本专利技术不是关键性的，只要维持了正确的表位。期望地，寡肽可以尽可能得小而仍然保持大寡肽的实质上所有的生物活性，并且其有效阻断癌细胞侵袭和转移。“寡肽”与“合成肽”在本申请中可互换使用。在本专利技术中所用的寡肽是“分离的”但“生物学纯”的合成肽。如本文所用，氨基酸残基的单字母符号为A(丙氨酸)；R(精氨酸)；N(天冬酰胺)；D(天冬氨酸)；C(半胱氨酸)；Q(谷氨酰胺)；E(谷氨酸)；G(甘氨酸)；H(组氨酸)；I(异亮氨酸)；L(亮氨酸)；K(赖氨酸)；M(甲硫氨酸)；F(苯丙氨酸)；P(脯氨酸)；S(丝氨酸)；T(苏氨酸)；W(色氨酸)；和Y(酪氨酸)。氨基酸置换通常是单一残基的。置换、缺失、插入或其任意组合可联合起来以得到寡肽。保守的氨基酸置换包括用具有相似的电荷、大小和/或疏水性特征的氨基酸替换一个或多个氨基酸，例如谷氨酸(E)-天冬氨酸(D)氨基酸置换。非保守的置换包括用具有相异的电荷、大小和/或疏水性的氨基酸替换一个或多个氨基酸，例如谷氨酸(E)-缬氨酸(V)置换。本专利技术旨在包括寡肽的保守性改变(置换、缺失、插入或其任意组合)，只要阻断癌细胞侵袭和转移的有效性实质上未改变。Rath等人(J Applied Nutr.4462-69，1992；J Orthomolecular Med.811-20，1993)假定具有高亲水性最大限度(high hydrophilicitymaxima)和构象及电荷的寡本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于阻断癌症侵袭和转移的合成寡肽序列，其类似于金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）序列的特异性寡肽序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：马蒂亚斯拉特，施朗奈克，阿莱克斯圣德拉尼德兹维克，
申请(专利权)人：马蒂亚斯拉特，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]