重组表达的羧肽酶B及其纯化制造技术

本发明专利技术提供了一种生产来源于非动物宿主有机体的，具有来自前羧肽酶Ｂ酶原的羧肽酶Ｂ活性的蛋白的制备方法。在非变性条件下，由酶原活化得到羧肽酶Ｂ。尤其是，该活化是在避免前肽与活化的羧肽酶Ｂ酶的不必要的非共价结合的条件下进行的。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
更特别地，本专利技术涉及一种具有羧肽酶B活性的蛋白的无酶活性前体的生产和进一步加工。本专利技术一方面涉及一种具有羧肽酶B活性的蛋白的活化以及伴随的纯化。
技术介绍
羧肽酶是一种水解C-末端肽键的酶。羧肽酶家族包括金属、丝氨酸、和半胱氨酸羧肽酶。根据其底物特异性，这些酶被称为羧肽酶A(裂解脂肪族残基)或羧肽酶B(裂解碱性氨基酸残基)。羧肽酶B(EC3.4.17.2)是一种催化从多肽的C-末端位置水解碱性氨基酸、赖氨酸、精氨酸、和鸟氨酸的酶 羧肽酶B的前体为一种存在于绝大多数脊椎动物胰腺中的酶原或前酶原(参见Folk J.综述的Carboxypeptidase B，inThe Enzymes3，P.Boyer，Academic Press，NY，57，1971)。羧肽酶B可在胰蛋白酶消化产物的进一步降解中发挥功效，其对该底物的特异性作用非常相似于羧肽酶A对于胰凝乳蛋白酶产物的特异作用。羧肽酶B同样具有酯酶活性，这与酶的金属含量有关(Folk J.&Gladner，J.BiochimBiophys Acta(1961)48，139-47；Z本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产具有羧肽酶Ｂ活性的蛋白的方法，包括如下步骤：ａ）提供一种含有编码由Ｎ－末端与组氨酸标记融合的大鼠前羧肽酶Ｂ和信号肽构成的前体蛋白的核苷酸序列的载体，由此任选地在组氨酸标记和信号肽之间或在组氨酸标记和大鼠羧肽酶Ｂ之间插 入一种间隔序列；（ｂ）采用该载体转化一种微生物宿主有机体；（ｃ）在含有营养物和碳源的生长培养基中培养该微生物宿主有机体，其中微生物宿主有机体表达前体蛋白并将组氨酸标记的前羧肽酶Ｂ分泌至生长培养基中；（ｄ）把步骤（ｃ） 的生长培养基中的分泌的组氨酸标记的前羧肽酶Ｂ固定在能结合组氨酸标记的颗粒状的金属...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：S格拉瑟，F盖佩尔，T柯施鲍姆，B雷克塞尔，JP塔尔霍菲，R米勒，C吉塞尔，H埃克施泰因，E沃尔夫，
申请(专利权)人：霍夫曼—拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]