重组生产和纯化蛋白激酶的改进方法技术

一种重组生产和纯化蛋白激酶的方法，所述蛋白激酶选自由酪氨酸蛋白激酶和丝氨酸／苏氨酸激酶组成的组，所述方法通过在微生物宿主细胞中表达编码所述激酶的核酸，形成包含所述激酶的内含体，分离，溶解，复性，和纯化所述激酶来进行，其特征在于所述纯化是通过在至少７０％所述蛋白激酶不结合所述吸附剂的条件下与疏水吸附剂进行疏水相互作用而进行和回收不结合所述吸附剂的蛋白激酶。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及在原核生物中通过内含体。
技术介绍
蛋白激酶通过向蛋白质添加磷酸基团来调控许多不同的细胞增殖、分化、和信号过程(Hunter，T.，Cell，50(1987)823-829)。蛋白激酶常常以它们的底物、它们的调控分子、或突变表型的一些方面命名。就底物而言，蛋白激酶可以分成两组；将酪氨酸残基磷酸化的称为蛋白质酪氨酸激酶即PTK，和将丝氨酸或苏氨酸残基磷酸化的称为丝氨酸/苏氨酸激酶即STK。几乎所有的激酶都包含类似250-300个氨基酸的催化结构域。N端结构域结合并定向ATP(或GTP)供体分子。较大的C端部分结合蛋白质底物，并执行将磷酸由ATP转移至丝氨酸、苏氨酸、或酪氨酸残基的羟基。可以根据位于激酶结构域的环的某一端或插入其环中的不同氨基酸序列(通常在5和100个残基之间)将激酶分类成家族。这些外加氨基酸序列能够调控各自激酶，因为它识别其靶蛋白并与其相互作用。激酶结构域的一级结构是保守的，而且可以进一步细分成11个亚结构域。这11个亚结构域的每一个都包含特定残基和基序或氨基酸样式，它们是亚结构域的特征，而且这些亚结构域是高度保守的(Hardie，G.和Hanks，S本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组生产和纯化蛋白激酶的方法，所述蛋白激酶选自由酪氨酸蛋白激酶和丝氨酸／苏氨酸激酶组成的组，所述方法通过在微生物宿主细胞中表达编码所述激酶的核酸，形成包含所述激酶的内含体，分离，溶解，复性，和纯化所述激酶来进行，其特征在于所述纯化是通过在至少７０％所述正确折叠的蛋白激酶不结合所述吸附剂的条件下与疏水吸附剂进行疏水相互作用而进行和回收不结合所述吸附剂的蛋白激酶。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：胡贝特赫腾贝格尔，康拉德霍诺尔德，克里斯蒂安克莱因，彼得拉吕格尔，
申请(专利权)人：霍夫曼—拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]