一种用于诊断原发性肝癌的特异性生物标志物及其筛选方法与应用技术

一种用于诊断原发性肝癌的特异性生物标志物及其筛选方法及应用，利用Boyden小室分离肝癌转移细胞的突出与胞体，从亚细胞结构出发，运用改良的Boyden小室法分离肝癌转移细胞胞体和突出，利用Western‑blot、RNA染色、免疫荧光等技术验证分离结果。研究在HCCLM3肝癌细胞胞体与突出中差异表达的情况、筛选出与HCC浸润转移过程有关的微小RNA，在临床上实验证明个体血清hsa‑let‑7a‑5p的变化对于HCC的诊断有较高的灵敏度及特异性。本发明专利技术将为临床诊断原发性肝癌提供一种新的诊断手段，在辅助HCC的治疗以及病程监测上有一定的潜在临床价值，通过let‑7a‑5p的ROC曲线，以及let‑7a‑5p与CEA联用、let‑7a‑5p与AFP联用、let‑7a‑5p与AFP和CEA联用的ROC曲线，提高了灵敏度及特异性，诊断价值得到了明显的提高。

A specific biomarker for the diagnosis of primary liver cancer and its screening method and Application

For specific biomarkers and screening method and application in diagnosis of primary hepatocellular carcinoma, using Boyden cell separation cell protrusion and metastasis of hepatocellular carcinoma cell body, starting from the subcellular structure, using isolated liver cancer cells Boyden cell transfer method improved and outstanding separation results by Western RNA staining, blot, immunofluorescence test. Study on HCCLM3 cell somata with prominent differences in the expression of screening with HCC, invasion and metastasis of small RNA, the clinical experiments prove that individual variation of serum HSA let 7a 5p has highly sensitivity and specificity for the diagnosis of HCC. The present invention provides a new diagnostic method for clinical diagnosis of primary hepatocellular carcinoma, in the treatment of auxiliary HCC and disease monitoring has potential clinical value, through the ROC let 7a 5p curve, ROC curve and let 7a 5p combined with CEA, let 5p and AFP 7a combined with let, 7a 5p and AFP combined with CEA, improve the sensitivity and specificity of diagnosis are improved obviously.

【技术实现步骤摘要】
一种用于诊断原发性肝癌的特异性生物标志物及其筛选方法与应用
本专利技术具体涉及分子生物
，具体涉及一种用于诊断原发性肝癌的特异性生物标志物及其筛选方法及应用。
技术介绍
肝细胞性肝癌（Hepatocellularcarcinoma，HCC）是世界范围内的第五种最常见的恶性肿瘤。尽管这些年在HCC的诊疗上有很大的进步，但由于临床上HCC经常会有复发和转移，HCC患者的5年生存率仍然相当低。HCC的发生和发展是一个典型的多阶段过程：首先是肝脏组织在外界刺激下（B型肝炎病毒（HBV）或丙型肝炎病毒（HCV）感染、黄曲霉毒素B1的摄入量或酒精滥用等）发生慢性肝炎或肝硬化，然后在经历一系列增生和不典型增生阶段后，最终获得肝内转移和远端转移的恶性表型。肿瘤的浸润转移是指肿瘤细胞脱离其原发部位，向其它部位传播，进而浸润正常组织，并经过淋巴道、血管或体腔及其它方式，转运到继发的靶组织或器官，从而继续增殖生长，形成与原发肿瘤相同性质的继发肿瘤的过程。细胞开始形成局部浸润和远处转移能力是恶性肝肿瘤早期特有的性质，因此研究肝肿瘤细胞浸润和转移初期机制对临床诊疗有十分重要的意义。而肝癌的进展涉及到很多本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于诊断原发性肝癌的特异性生物标志物，其特征在于，所述的特异性生物标志物为miRNA hsa‑let‑7a‑5p。

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断原发性肝癌的特异性生物标志物，其特征在于，所述的特异性生物标志物为miRNAhsa-let-7a-5p。2.一种权利要求1所述的用于诊断原发性肝癌的特异性生物标志物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从已建成的细胞模型中分离细胞突出和细胞体；(2)从分离的细胞突出和细胞体中分别提取RNA；(3)在前期miR-SEQ测序结果内筛选本体表达高且差异倍数大的候选miRNAs；(4)收集HCC患者组织、血浆样本及临床资料，提取miRNA；(5)将抽提的miRNA逆转录为cDNA；(6)进一步用实时荧光定量PCR分析方法对正常人和HCC患者进行逐个验证筛选，并对筛选出具有监测肝细胞性肝癌转移性的特异性生物标志物的miRNA并对临床...

【专利技术属性】
技术研发人员：申志发，季敬璋，涂可欣，杨丽虹，童庆超，叶相来，闫相楠，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33