本发明专利技术涉及利用将转基因鱼与具有不同表型或行为模式的鱼进行配种而生产新观赏鱼的方法。所获得的新的转基因鱼具有与任一亲代不同的表型或行为模式。本发明专利技术同时提供由此方法生产的新的转基因鱼。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生产新观赏鱼的方法以及利用此方法所生产出的新观赏鱼。
技术介绍
转基因技术今日已成为研究基因功能的重要工具。此技术首先是在小鼠中发展出来。研究者将外来的DNA注入受精卵中后，发现某些经注射之受精卵长成的小鼠保留外来DNA。观赏鱼是一个有全球市场的鱼类产业。因此，如能利用重组DNA技术以及转基因技术来修改观赏鱼的外观具有巨大的商业价值。目前已发展出许多将外源基因置入鱼中的技术，包括微注射(microinjection)、电穿孔(electroporation)、精子介导的基因转移(sperm-mediated gene transfer)、基因枪、脂质体介导的基因转移以及将DNA直接注入肌肉组织(Xu等，DNA Cell Biol.18，85-95(1999))。已经产生转基因鱼来提供娱乐用途。例如表达GFP荧光的荧光鱼便是将与鱼类特定基因启动子(promoter)连接的GFP基因注入受精卵中所产生(Hamada，K.等，Mol.Marine Biol.Biotech.，7，173-180(1998))。Tanaka等人生产仅在生殖细胞有绿色荧光的转基因青鳉鱼(Tanakal等，第22届Molecular Biology Society of Japan年度会议内容简述pp.458(1999))。但很明显的，逐一以转基因技术来生产不同荧光色、不同外观或行为模式的观赏鱼是十分费时费力且费用很高的。养殖鱼业的目标之一便是利用遗传基因的变化生产更进步的鱼种。子代鱼的基因组是亲代雄性与雌性配子的基因组的结合，经由融合而形成胚胎，并进而成为子代鱼。因此，将转基因鱼与不同表型或行为模式的同种或不同种鱼杂交，例如不同斑纹、条纹颜色或是对环境耐受性的鱼，可比逐一生产转基因鱼以更快速及廉价的方式提供观赏鱼之更多选择，这些鱼是现有的转基因鱼技术所无法企及的。
技术实现思路
本专利技术提供一生产新观赏鱼的方法，其包括(a)生产一种含有一或多个经连接荧光基因的转基因鱼；(b)将此转基因鱼与不同表型或行为模式的鱼杂交；及(c)筛选具有与亲代不同表型或行为模式的转基因子代。本专利技术同时提供经由此方法生产的新转基因鱼。附图说明图1揭示质粒图(a)pβ-肌动蛋白-EGFP；(b)pβ-肌动蛋白-EGFP-ITR。图2揭示由质粒pOBA-109与pDsRed2-1-ITR制备质粒pβ-DsRed2-1-ITR的构建过程。图3揭示p-αDsRedITR质粒构建图，包括插入的基因片段与限制酶切点。图4揭示将红色TK-1与香港青鳉鱼进行配种，将绿色TK-1与香港青鳉鱼进行配种，将红色TK-2与多彩豹纹斑马进行配种及将红色TK-2与豹纹斑马进行配种，将红色TK-2与小斑马进行配种之过程。图5揭示(a)红色TK-1，(b)香港青鳉鱼与(c)红色TK-1×香港青鳉鱼的图片。图6揭示(a)绿色TK-1；(b)香港青鳉鱼与(c)绿色TK-1×香港青鳉鱼的图片。图7揭示(a)红色TK-2；(b)多彩豹纹斑马与(c)红色TK-2×多彩豹纹斑马的图片。图8揭示(a)红色TK-2；(b)豹纹斑马与(c)红色TK-2×豹纹斑马的图片。图9揭示(a)红色TK-2；(b)小斑马与(c)紫荧光仙子的图片。具体实施例方式本专利技术提供一种生产新观赏鱼的方法，此观赏鱼具有与其亲代不同的表型或行为模式。本专利技术也提供经由此方法生产的新观赏鱼。本文中所用的观赏鱼是指含有外源的基因载体之转基因鱼或其子代鱼。含有基因载体的鱼包括经由含有基因载体的胚胎所长成的鱼。本文中所用的外源基因载体是指核酸经由人为引入，或是最初经由人为引入鱼中。术语人为引入意欲排除经由一般交配引入基因载体。意即，经由交配所最初引入动物品系的基因是被排除。然而由含有基因载体的鱼中转移(一般交配)而获得该外源基因载体(即该基因载体最初是经由人为引入的)的鱼是被认为含有外源基因载体的。此种鱼为被引入外源基因载体的鱼的后代。本文中所用鱼的后代为任何经由有性生殖或是克隆(cloning)繁殖并且继承亲代遗传物质的鱼。在这个脉络中，克隆是指自DNA或单一鱼细胞或多个鱼细胞生产一基因组完全相同的鱼。能往下繁殖出其它鱼的系为亲代鱼(progenitor fish)。本文中所用自单一或多数细胞(例如胚胎细胞)成长至鱼的过程是指自受精卵或胚胎细胞(及其子代细胞)生长，分裂与分化成为成鱼的生长过程。以下实施例说明如何自亲代鱼可产生具有不同表型与行为模式的子代鱼的方法及其用途。实施例中所述的转基因鱼对于增加观赏鱼的商业价值特别有成果。转基因载体转基因载体为生产转基因鱼所引入鱼中的基因物质。这些基因载体是人为方式引入鱼中。引入的方式与常用基因载体的结构需考虑其为外源的基因载体。虽然转基因载体可以由任何核酸序列构成，在本专利技术中所揭示转基因鱼优选的转基因载体系将表达序列(expression sequence)功能性连接到能编码表达产物之序列。优选的转基因载体同时包括其它能帮助基因表达，稳定或使使基因载体插入鱼的基因组的部份。本文中所用转基因载体之部份是指功能性或可操作地连接以使得两部份连接后能同时作用。鱼种在此揭示的基因载体与方法可适用各类的鱼。本文中所用的鱼是指任何分类上属于鱼纲(pisces)的动物。优选的鱼为在科学上或商业上有应用价值的鱼种，包括慈鲷(Cichlidae)(如非洲慈鲷(Pseudotropheus)、南美慈鲷(Cichlasoma)、短鲷(Apistogramma)、神仙(Pterophyllum)、七彩神仙(Symohysodon))，鲶鱼(Catfishes)(如鼠鱼(Corydoras)、琵琶鼠(Ancistrus)、Pterygoplichthys)，斗鱼(Fighting Fishes)(如Betta、彩兔(Macropodus))，加拉辛科(Characidae)(如灯鱼(Tetras)或斧头鱼(Carnegiella))，鲤科(Cyprinidae)(如锦鲤(Cyprinus)、斑马鱼(Brachydanio)、Danio或金鱼(Carassius))，鳉鱼(Killifishes)(如青鳉鱼(Medaka)、卵生鳉鱼(Rivulines)、卵胎生鳉鱼(Livebearing Toothcarps))。优选的鱼种为青鳉鱼与斑马鱼(Brachydanio或Danio)。青鳉鱼与斑马鱼作为观赏鱼的一大优势是它们均大部份透明(Kimmel，Trends Genet5283-8(1989))。一般斑马鱼的培养与照顾在Streisinger，Natl.Cancer Inst.Monogr.6553-58(1984)中皆有详述。青鳉鱼可自以下种类选取Oryziasjavanicus、Oryzias latipes、Oryzias nigrimas、Oryzias luzonensis、Oryziasprofundicola、Oryzias matanensis、Oryzias mekongensis、Oryzias minutillus、Oryzias melastigma、香港青鳉鱼(Oryzias curvinotus)、O.celebensis.、X.oophorus或X.saracinorum本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种产生观赏鱼的方法，该方法包含：ａ）生产一转基因鱼，其携有一或多个荧光蛋白基因；ｂ）将此转基因鱼与具有不同表型或行为模式的鱼进行配种；及ｃ）筛选具有转基因的子代，所述子代具有不同于任一亲代的表型与行为模式。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林学廉，陈盈村，
申请(专利权)人：邰港科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：71[中国|台湾]
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