本发明专利技术涉及包含多种因子Ⅶ多肽或因子Ⅶ相关多肽的制剂，其中所述多肽包含天冬酰胺连接的和／或丝氨酸连接的寡糖链，而且其中至少一个寡糖基团共价附着了至少一个聚合基团。该聚合基团可以是聚环氧烷（ＰＡＯ），例如聚乙二醇（ＰＥＧ）。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及包含因子VII缀合物的组合物，所述缀合物具有预定的糖基化样式。
技术介绍
因子VII是作为分子量大约50kDa的单链糖蛋白在肝中合成并分泌到血液中的维生素K依赖性血浆蛋白。FVII酶原通过蛋白水解切割转变成激活形式(FVIIa)。与组织因子(TF)复合的FVIIa能够将因子IX和因子X二者转变成它们的激活形式，继而发生导致迅速凝血酶生成和纤维蛋白形成的反应。参与凝血级联反应的蛋白质，包括例如VII、因子VIII、因子IX、因子X、和蛋白C，被证明是治疗多种病理学状况的有用治疗剂。因此，对于制药学上可接受的且展示均一和预定临床功效的包含这些蛋白质的制剂的需求日益增长。由于使用人血浆作为制药学产品来源有许多缺点，因此优选在重组系统中生产这些蛋白质。然而，凝结蛋白需要进行多种共翻译修饰和翻译后修饰，包括例如天冬酰胺连接(N连接)糖基化、O连接糖基化、和谷氨酸残基的γ-羧化。在使用异源细胞作为宿主用于大规模生产蛋白质时，这些修饰在质量上或数量上是不同的。具体而言，异源细胞中的生成常常导致不同排列的糖型，即具有不同的共价连接寡糖结构的相同多肽。在不同的系统中，治疗性蛋白质寡糖结构中的变异尤其与免疫原性和体内清除有关。除了体内清除以外，功能性体内半衰期对于化合物在体内具有“治疗性利用度”的时段而言同样是重要的。rFVIIa的循环半衰期是大约2.3个小时(《Summary Basis forApproval for NovoSeven》即批准NovoSeven的简要根据，FDA证明号96-0597)。人重组FVIIa的商品化制剂以NovoSeven出售。NovoSeven是市场上能够获得的有效且可靠的治疗出血发作的唯一rFVIIa。相对较高的施用剂量和频率是达到并维持期望的治疗或预防效果所必需的。因而，难以获得适当的剂量调节，而且因需要频繁的静脉内施用而限制了患者的生活方式。具有较长循环半衰期的分子将减少必需施用的次数。考虑到当前FVIIA产品与频繁注射的联系，显然需要改进的FVII分子。改进循环的一种方法是确保由体内清除的速率得到降低。如上所述，治疗性蛋白质寡糖结构中的变异尤其与体内清除有关。另外，将化学模块附着于多肽上也可能赋予多肽以降低的肾清除。无活性形式的FVII已有报道。灭活形式能够与野生型FVII或FVIIa竞争与组织因子的结合并抑制凝结活性。灭活形式的FVIIa被建议用于治疗超凝结状况的患者，诸如患有败血症、有心肌梗塞风险、或有血栓性中风风险的患者。WO 98/32466建议可以将FVII以及许多其它蛋白质进行PEG化，但是不含这个方面的任何其它信息。WO 01/58935要求保护非多肽模块(如PEG)与多肽的缀合物，所述多肽的氨基酸序列因导入或消除了至少一个包含非肽模块的附着基团的氨基酸残基而与野生型FVII不同。US 4847325建议可以通过使PEG衍生物与经过氧化的集落刺激因子-1(CSF-1)反应而将CSF-1附着于PEG上。因此，本领域需要提供凝结蛋白制剂的组合物和方法，特别是包含改进的重组人因子VII、修饰的因子VII、或因子VII相关多肽的制剂。专利技术概述本专利技术的研究人员发现，具有包含至少一个寡糖基共价连接至至少一个聚合基团上的糖型样式的因子VII多肽的制剂展示改进的功能特性。因此，本专利技术涉及提供这些缀合蛋白制剂的方法和组合物。因此，在第一个方面中，本专利技术涉及包含多种因子VII多肽或因子VII相关多肽的制剂，其中所述多肽包含天冬酰胺和/或丝氨酸连接的寡糖链，而且其中至少一个寡糖基团共价附着了至少一个聚合基团。在它的一个实施方案中，聚合基团共价附着于唾液酸模块上。在它的另一个实施方案中，聚合基团共价附着于半乳糖模块上。在它的一个实施方案中，大约94-100％的寡糖链包含至少一个唾液酸模块。在它的一个实施方案中，大约94-100％的寡糖链包含至少一个唾液酸模块，而且其中少于大约25％的寡糖链包含至少一个未加帽的触角(antenna)。在一个实施方案中，少于大约10％的寡糖链包含至少一个未加帽的触角。在一个实施方案中，少于大约5％、优选少于大约2％的寡糖链包含至少一个未加帽的触角。在一个实施方案中，大约96-100％的寡糖链包含至少一个唾液酸模块。在一个实施方案中，大约98-100％的寡糖链包含至少一个唾液酸模块。在一个实施方案中，天冬酰胺连接的寡糖链位于与野生型人FVIIa(附图说明图1)中氨基酸残基Asn-145和Asn-322对应的位置。在一个实施方案中，丝氨酸连接的寡糖链位于与野生型人FVIIa(图1)中氨基酸残基Ser-52和Ser-60对应的位置。在一个实施方案中，聚合物选自聚环氧烷(PAO)，包括聚亚烷基二醇(PAG)，诸如聚乙二醇(PEG)和聚丙二醇(PPG)、分支PEG、聚乙烯醇(PVA)、聚羧酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯-共-马来酸酐、聚苯乙烯-共-马来酸酐、和葡聚糖，包括羧甲基葡聚糖、聚氨基甲酸酯、聚酯、和聚酰胺。在一个实施方案中，聚合物是聚乙二醇(PEG)。在一个实施方案中，聚乙二醇是分子量300-100,000Da的PEG，诸如大约500-20,000Da、或大约500-15,000Da、或2-15kDa、或3-15kDa、或3-12kDa、或大约10kDa。在一个实施方案中，多肽具有野生型因子VII的氨基酸序列(图1)。在一个实施方案中，多肽是野生型因子VIIa。在一个实施方案中，因子VII多肽选自S52A-因子VII、S60A-因子VII、第290位与第291位残基之间受到蛋白水解切割的因子VII、第315位与第316位残基之间受到蛋白水解切割的因子VII、发生氧化的因子VII、L305V-FVII、L305V/M306D/D309S-FVII、L305I-FVII、L305T-FVII、F374P-FVII、V158T/M298Q-FVII、V158D/E296V/M298Q-FVII、K337A-FVII、M298Q-FVII、V158D/M298Q-FVII、L305V/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII、V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII、K157A-FVII、E296V-FVII、E296V/M298Q-FVII、V158D/E296V-FVII、V158D/M298K-FVII、S336G-FVII、第290位和/第291位(优选第290位)的氨基酸残基已被取代的因子VII序列变体、以及第315位和/或第316位(优选第315位)的氨基酸残基已被取代的因子VII序列变体。在另一个实施方案中，因子VII多肽选自WO 01/83725、WO 02/22776、WO 02/77218、WO 03/27147、和WO 03/37932中公开的与野生型FVIIa相比生物学活性升高的因子VII变体；L305V/K337A-FVII，L305V/V158D-FVII，L305V/E296V-FVII，L305V/M298Q-FVII，L305V/V158T-FVII，L305V/K337A/V1本文档来自技高网...
【技术保护点】
包含多种因子Ⅶ多肽或因子Ⅶ相关多肽的制剂，其中所述多肽包含天冬酰胺连接的和／或丝氨酸连接的寡糖链，而且其中至少一个寡糖基团共价附着了至少一个聚合基团。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：NK克劳森，S比约恩，C贝伦斯，PW加里贝，
申请(专利权)人：诺和诺德医疗保健公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
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