新颖的脂肪酶及其用途制造技术

本发明专利技术涉及新鉴定出来的多核苷酸序列，所述序列包含编码来自Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　　ｎｉｇｅｒ的新颖的脂肪分解酶的基因。本发明专利技术公开了所述新颖基因的全长核苷酸序列，包含所述的新颖的脂肪分解酶的全长编码序列的ｃＤＮＡ序列以及所述的全长功能蛋白质及其功能等同物的氨基酸序列。本发明专利技术还涉及在工业过程中使用上述酶的方法和诊断真菌感染的方法。本发明专利技术中还包括了用本发明专利技术的多核苷酸转化过的细胞以及这样的细胞：其中，本发明专利技术的脂肪分解酶被遗传修饰，以增加该酶的活性和／或表达水平。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新鉴定出来的多核苷酸序列，所述序列包含编码来自Aspergillus niger的新颖的脂肪分解酶(lipolytic enzyme)的基因。本专利技术公开了所述新颖基因的全长核苷酸序列，包含所述的新颖的脂肪分解酶的全长编码序列的cDNA序列以及所述的全长脂肪分解酶及其功能等同物的氨基酸序列。本专利技术还涉及在工业过程中使用上述酶的方法和诊断真菌感染的方法。本专利技术中还包括了用本专利技术的多核苷酸转化过的细胞以及这样的细胞其中，本专利技术的脂肪分解酶被遗传修饰，以增加该酶的活性和/或表达水平。
技术介绍
烘焙产品例如面包是从面团来制备的，面团通常由基本材料制成(小麦)面粉、水以及可选地，盐。其它添加成分取决于所烘焙的产品，其可以是糖、香料等等。对经过发酵的产品而言，主要使用面包酵母，其次是使用化学发酵系统，例如(产)酸(化合物)和碳酸氢盐的组合。为改善所述面团的操作属性和/或所述烘焙产品的最终属性，人们持续努力以发展改善属性的加工助剂。此处将加工助剂定义为改善所述面团的操作属性和/或所述烘焙产品的最终属性的化合物。可能被改善的面团属性包含可加工性、气体保持能力、降低的粘性、弹性、延展性、成型性等等。可能被改善的所述烘焙产品的属性包含产品块的体积、外壳松脆性、碎屑质地以及柔软度、有关香味的腐败和保存期限。改善面团和/或烘焙产品的加工助剂可以分为两类化学添加剂和酶(也称为烘焙用酶)。酵母、酶和化学添加剂通常是分别加入到面团中的。酵母可以作为液体悬浮剂、以压榨的形式、作为活性干酵母(active dry yeast，ADY)或速发干酵母(instant dry yeast，IDY)加入。上述酵母制剂的区别在于水和酵母干物质的含量。液体酵母具有的酵母干物质含量低于25％(w/v)。膏质酵母是液体酵母的特殊形式，其具有的干物质含量在17％和23％之间(w/v)。压榨酵母具有的酵母干物质含量在25％-35％之间(w/v)，干酵母制剂具有的酵母干物质的含量在92％-98％之间(w/v)。酶可以以干燥的例如颗粒状的形式或以液体形式被加入。大多数情况下，化学添加剂以粉末形式被加入。此外，适合于特殊烘焙应用的加工助剂组合物，可以由化学添加剂和酶的专门混合物来构成。由上述材料和加工助剂来制备面团的方法在本领域是公知的，所述制备方法包括将所述材料和加工助剂混合，并包括一个或多个成型及发酵步骤。用此类面团来制备烘焙产品的方法在本领域也是公知的，所述制备方法包括对面团进行成型、造型及进一步的发酵，以及随后在需要的温度和时间下进行烘焙。改善属性的化学添加剂包括氧化剂、还原剂、用作面团调整剂的乳化剂或用作碎屑软化剂的乳化剂、脂肪类物质；所述氧化剂例如是抗坏血酸、溴酸盐和偶氮碳酸氢盐，所述还原剂例如是L-半胱氨酸和谷胱甘肽，所述用作面团调整剂的乳化剂例如是二乙酰酒石酸甘油单/二酯(diacetyltartatic esters of mono/diglycerides，DATEM)、硬脂酰乳酸钠(sodiumstearoyl lactylate，SSL)、硬脂酰乳酸钙(calcium stearoyl lactylate，CSL)，所述用作碎屑软化剂的乳化剂例如是单硬脂酸甘油酯(glycerolmonostearate，GMS)，所述脂肪类物质例如是甘油三酯(脂)或卵磷脂等等。用更多的天然产品来代替化学添加剂是消费者的需求，为此人们已经发展出了多种能改善面团和/或烘焙产品属性的烘焙用酶，可以用所有可能的组合形式来使用所述的酶，这取决于特定的烘焙应用的条件。合适的酶包括降解淀粉的酶，降解阿拉伯糖基木聚糖和其它半纤维素的酶，降解纤维素的酶，氧化酶，分解脂肪类物质的酶，降解、修饰或交联蛋白质的酶。降解淀粉的酶例如是内作用酶和外作用酶，所述内作用酶例如是alpha-淀粉酶、麦芽糖淀粉酶、支链淀粉酶或其它脱支酶，所述外作用酶用于去除葡萄糖(淀粉葡糖苷酶)、麦芽糖(beta-淀粉酶)、麦芽三糖、麦芽四糖和更高级的寡糖。降解阿拉伯糖基木聚糖或其它半纤维素的酶例如是木聚糖酶、戊聚糖酶、半纤维素酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、葡聚糖酶等等。降解纤维素的酶例如是纤维素酶、纤维二糖水解酶和beta-葡糖苷酶。氧化酶例如是葡糖氧化酶、己糖氧化酶、吡喃糖氧化酶、巯基氧化酶、脂肪氧化酶、漆酶、多酚氧化酶等等。分解脂肪类物质的酶例如是脂肪分解酶，例如三酰甘油脂肪酶、磷脂酶(例如A1、A2、B、C和D)和半乳糖脂酶。降解、修饰或交联蛋白质的酶例如是内作用蛋白酶(丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、天冬氨酰蛋白酶、巯基蛋白酶)、从多肽链的N-末端(氨肽酶)或C-末端(羧肽酶)切掉一个氨基酸或二肽或三肽等的外作用蛋白酶、对天冬酰胺或谷氨酰胺脱酰胺的酶，例如脱酰胺酶和肽谷氨酰胺酶(peptidoglutaminase)，或交联酶，例如谷氨酰胺转移酶。烘焙用酶可以方便地从微生物中制得。微生物性的烘焙用酶可以从多种来源中获得；杆菌菌种是细菌性的酶的通常来源，而真菌性的酶则通常产生自曲霉菌种。烘焙用酶可以被用于多种形式的烘焙制品。术语“烘焙制品”在此被定义为包含面包产品、卷、蛋糕、馅饼、松饼、酵母发酵的蛋糕及炸圈饼等，所述面包产品例如是烤模面包(tin bread)、面包块(loaves ofbread)、法式面包。在上述过程中，使用通过重组DNA技术获得的烘焙用酶是有好处的。此类重组的酶较之其相应的传统纯化所得到的酶具有很多优点。重组酶生产起来成本低，产量高，其不含细菌或病毒等污染物，也不含细菌毒素，还不会对其它的酶活性产生负面影响。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供新颖的多核苷酸，所述多核苷酸编码具有经过改善的属性的新颖的脂肪分解酶。本专利技术的进一步的目的是提供天然及重组生产的脂肪分解酶以及制造所述的酶的重组菌株。融合蛋白也是本专利技术的一部分，制造和使用本专利技术的多核苷酸及多肽的方法也属于本专利技术。本专利技术还有一个目的是提供新颖的脂肪分解酶，所述的酶能解决上述问题中的至少一个，或者所述的酶具有广泛的底物特异性，或所述的酶在被用于面团和/或烘焙产品时具有一种或多种改善的属性，所述属性选自由以下成员构成的组增加的面团强度、增加的面团弹性、增加的面团稳定性、降低的面团粘性、经过改善的面团延展性、经过改善的面团可加工性、增加的烘焙产品体积、经过改善的烘焙产品碎屑结构、经过改善的烘焙产品柔软度、经过改善的烘焙产品香味、经过改善的烘焙产品保鲜性、经过改善的烘焙产品颜色、经过改善的烘焙产品外壳。本专利技术提供了编码新颖的脂肪分解酶的新颖的多核苷酸。更具体地，本专利技术提供了具有核苷酸序列的多核苷酸，所述核苷酸序列优选在高严谨条件下，与选自由SEQ ID NO1、2、4、5、7、8、10、11、13、14、16、17、19、20、22、23、25、26、28、29、31、32、34、35、37和38所构成的组的序列杂交。本专利技术相应地提供了与选自由SEQ ID NO1、2、4、5、7、8、10、11、13、14、16、17、19、20、22、23、25、26、28、29、31、32、34、35、37和38所构成的组的序列同源性高于40％，例如约60％，优选65％，更优选为70％，进一步优选为75％、80％、85％、90本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种经过分离的多核苷酸，所述多核苷酸能与选自由ＳＥＱＩＤＮＯ：１、２、４、５、７、８、１０、１１、１３、１４、１６、１７、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２８、２９、３１、３２、３４、３５、３７和３８所构成的组的多核苷酸杂交。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查德奥尔本，乌尔里克福克斯，安德烈亚斯弗里茨，贝娅特丽克丝格哈德，奥利弗海因里希，希尔马伊尔根弗里茨，迪特尔梅尔，法维奥斯普雷亚菲科，克里斯琴瓦格纳，德莱克斯博尔，罗埃尔弗伯恩哈德梅玛，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]