一种分离蚯蚓纤溶酶单一组分的方法技术

本发明专利技术涉及一种分离蚯蚓纤溶酶单一组分的方法，特别是从中分离出一种为糖蛋白的蚯蚓３＃纤溶酶组分，其分子量为２４０５６道尔顿，与其它单组分蚯蚓纤溶酶相比较其体内溶栓作用最强，对凝血时间影响最小，可用于开发抗栓和溶栓药物。本发明专利技术以滤纸为载体，偶联大豆胰蛋白酶抑制剂，构成蚯蚓纤溶酶亲和层析系统，通过亲和层析和梯度洗脱从蚯蚓匀浆液分离出蚯蚓３＃纤溶酶组分。本发明专利技术的有益效果是由于改进了亲和层析介质，用廉价的滤纸代替昂贵的珠状琼脂糖，使生产成本大大降低，从而适合于大规模生产，另外它还具有方法简便实用的特点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种分离蚯蚓纤溶酶单一组分的方法，其特征在于以滤纸为载体，偶联大豆胰蛋白酶抑制剂，构成蚯蚓纤溶酶亲和层析系统，通过亲和层析和梯度洗脱从蚯蚓匀浆液分离出一种为糖蛋白的蚯蚓３＃纤溶酶组分，其分子量为２４０５６道尔顿；本方法的具体步骤如下：　 　（１）用常规方法制备蚯蚓匀浆液；（２）亲和层析系统的制备：ａ、载体的预处理：载体选用实验室用的定性滤纸，在两层滤纸之间夹一层尼龙窗纱后卷成滤纸卷、将滤纸卷放入烧杯中，将０．５～２．０ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠溶液倒入烧杯 中搅拌一小时，倒出溶液；再将同样浓度的氢氧化钠溶液并且其中含有１％～１０％的环氧氯丙烷和１ｍｇ／ｍｌ的ＮａＢＨ↓［４］倒入烧杯中、在５０～７０℃时搅拌１０～６０分钟，倒出溶液，用去离子水洗２～３次；ｂ、载体的活化：将上述预处 理过的滤纸卷采用常规方法进行活化；ｃ、载体与大豆胰蛋白酶抑制剂偶联：将上述经活化处理后的滤纸卷用０．１ｍｏｌ／Ｌ的碳酸氢钠溶液洗一次，然后将其浸入含有大豆胰蛋白酶抑制剂的碳酸氢钠溶液中，碳酸氢钠溶液的浓度为０．１ｍｏｌ／Ｌ， 其中大豆胰蛋白酶抑制剂的含量为５～５０ｍｇ／ｍｌ，４～８℃时，搅拌１８～２２小时，再依次用ＰＨ９．０的碳酸氢钠、ＰＨ４．０的醋酸－醋酸钠溶液清洗；最后将偶联了大豆胰蛋白酶抑制剂的滤纸卷悬浮于ＰＢＳ溶液中，该溶液ＰＨ７．４、内含１ｍｇ／ｍｌ的ＮａＢＨ↓［４］，４～８℃时，搅拌一小时，再用ＰＢＳ溶液洗２～３次；ｄ、装柱：将上述偶联了大豆胰蛋白酶抑制剂的滤纸卷除去水分后装入玻璃层析柱中；层析柱装好后用ＰＢＳ溶液进行平衡；（３）亲和层析：将蚯蚓匀浆液连 续泵入层析柱中，同时监测流出液的纤溶酶的含量，当流出液纤溶酶含量超过４～８μｇ／ｍｌ时，停止进样，然后用ＰＢＳ溶液平衡；（４）梯度洗脱：借助于梯度混合仪和输液泵进行连续洗脱，洗脱剂是由ＰＢＳ溶液和０～６ｍｏｌ／Ｌ的尿素组成的 混合洗脱剂，用分布收集器收集洗脱下来的样品，分别收集蚯蚓２＃、３＃、４＃纤溶酶组分的洗脱峰，２＃、３＃、４＃纤溶酶组分分别对应２、３、４号洗脱峰；最后将洗脱样品对水透析，冻干保存。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓瑜，静天玉，武金霞，
申请(专利权)人：河北大学，
类型：发明
国别省市：13[中国|河北]