NOGO受体拮抗剂制造技术

本发明专利技术公开的是具有免疫原性的Ｎｏｇｏ受体１多肽、Ｎｏｇｏ受体１抗体及其抗原结合片段、可溶性Ｎｏｇｏ受体及其融合蛋白，以及编码上述多肽／蛋白质的核酸。本发明专利技术还公开了组合物，组合物包含这些Ｎｏｇｏ受体抗体及其抗原结合片段、具有免疫原性的Ｎｏｇｏ受体－１多肽、可溶性Ｎｏｇｏ受体及其融合蛋白以及编码上述多肽／蛋白质的核酸，还有制备和使用上述多肽／蛋白质和核酸的方法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及神经生物学和分子生物学。更为具体的是，本专利技术涉及具有免疫原性的Nogo受体-1多肽，Nogo受体-1抗体及其抗原结合片段，可溶性Nogo受体及其融合蛋白以及编码上述多肽/蛋白质的核酸。本专利技术进一步涉及组合物，其包含这些Nogo受体抗体及其抗原结合片段、具有免疫原性的Nogo受体-1多肽、可溶性Nogo受体及其融合蛋白以及编码上述多肽/蛋白质的核酸，以及制备和使用上述多肽/蛋白质和核酸的方法。
技术介绍
神经元的轴突和树突是自神经元发出的长的细胞延伸。延伸的轴突或者神经突末端包含特化的区域，称为生长锥。生长椎感受局部环境并且指导轴突向神经元的目标细胞生长。生长椎对许多环境信号产生应答，例如表面黏连性、生长因子、神经递质和电场。在生长椎处对生长的指导涉及了多种不同类型的黏连分子、细胞间信号以及刺激和抑制生长椎的因子。正在生长的神经突其生长椎以不同的速率生长，但通常是每天一到两毫米。生长椎具有手的形状，具有宽而扁平的突出(微刺突或者丝状伪足)，以不同方式黏附到胚胎的表面。丝状伪足一直是有活性的，有一些丝状伪足缩回到生长椎内，而其他丝状伪足继续伸长，通过基质。不同丝状伪足之间的延伸形成层形足板。生长椎用其层形足板和丝状伪足探查其前方及两侧的区域。当伸长接触到一个不适于生长的表面时，就会缩回。当伸长接触到一个适于生长的表面时，它就会继续延伸并且指引生长椎朝这个方向生长。生长椎可以被基质表面特性的微小变化所指引。当生长椎到达一个适当的目标细胞时就会产生一个突触连接。神经细胞的功能受到其临近环境中神经元和其他细胞之间接触的巨大影响(U.Rutishauser，T.M.Jessell，Physiol.Rev.1988，68，p.819)。这些细胞包括特化的神经胶质细胞、中枢神经系统内的少突神经胶质细胞、外周神经系统内的施旺细胞，该细胞用髓鞘(一种多层膜组成的绝缘结构)将神经元的轴突包住(G.Lemke，in AnIntroduction to Molecular Neurobiology，Z.Hall，Ed.，p.281)。尽管中枢神经系统神经元具有损伤之后再生的能力，但是由于在髓鞘中存在抑制蛋白并且很可能由于这些细胞所处的局部环境中通常具有其他类型的分子，神经元的再生受到抑制(Brittis andFlanagan，Neuron 2001，30，pp.11-14；Jones et al.，J.Neurosci.2002，22，pp.2792-2803；Grimpe et al.，J.Neurosci.2002，22，pp.3144-3160)。在少突神经胶质细胞中已经鉴别出了许多髓鞘抑制蛋白，例如NogoA(Chen et al.，Nature，2000，403，434-4 39；Grandpreetal.，Nature 2000，403，439-444)，髓鞘相关糖蛋白(MAG，McKerracher et al，Neuron 1994，13，805-811；Mukhopadhyay et al，Neuron 1994，13，757-767)以及少突神经胶质细胞糖蛋白(OM-gp，Mikol and Stefans son，J.Cell.Biol.1988，106，1273-1279)。在分别的研究中，发现这些蛋白中每一种都是神经元Nogo受体-1的配基(Wang et al.，Nature 2002，417，941-944；Liu et al.，Science，2002，297，1190-93；Grandpre et al.，Nature 2000，403，439-444；Chenet al.，Nature，2000，403，434-439；Domeniconi et al.，Neuron，2002，35，283-90)。Nogo受体1是一种糖磷脂酰肌醇(GPI)锚定的膜蛋白，它含有8个富含亮氨酸的重复(Fournier et al.，Nature 2001，409，341-346)。在与抑制蛋白(例如NogoA，MAG和OM-gp)发生相互作用时，Nogo受体1复合物转导信号，导致生长椎萎陷且神经突向外生长受到抑制。现在迫切需要抑制Nogo受体1与其配基结合且减弱髓鞘介导的生长椎萎陷及对神经突向外生长的抑制的分子。专利技术概述本专利技术涉及可溶性Nogo受体1多肽和含有这些多肽的融合蛋白，以及针对Nogo受体1的特异免疫原性区域的抗体及其抗原性片段。本专利技术还涉及与本专利技术抗体结合的免疫原性的Nogo受体1多肽。本专利技术还涉及编码本专利技术中多肽的核酸、载体和包含这些核酸的宿主细胞，以及制备这些多肽的方法。本专利技术中的抗体、可溶性受体和受体融合蛋白拮抗或者阻断Nogo受体1，并且用于抑制Nogo受体1与其配基的结合、抑制神经元中生长椎的萎陷以及降低神经元内神经突向外生长或者出芽的抑制。在一些实施方案中，本专利技术提供免疫原性的多肽，该多肽选自SEQ ID NO1，SEQ ID NO2，SEQ ID NO3，SEQ ID NO4和SEQ ID NO5。在一些实施方案中，本专利技术提供编码所述免疫原性多肽的核酸、包含所述核酸的载体和包含所述核酸或者载体的宿主细胞。在一些实施方案中，核酸与一段表达调控序列操作性地相连接。在一些实施方案中，本专利技术提供制备免疫原性多肽的方法，该方法包括以下步骤(a)培养包含编码免疫原性多肽的核酸或者含上述核酸的载体的宿主细胞；以及(b)从宿主细胞或者培养基中回收多肽。在一些实施方案中，本专利技术提供制备与Nogo受体1特异结合的抗体的方法，该方法包括以下步骤(a)用选自SEQ ID NO1，SEQ ID NO2，SEQ ID NO3，SEQ ID NO4和SEQ ID NO5的多肽或表达所述多肽的宿主细胞免疫宿主；和(b)收获抗体。在一些实施方案中，抗体或者其抗原结合片段是通过这种方法制备的。在一些实施方案中，抗体或者其抗原结合片段与选自下面的多肽发生特异结合SEQ IDNO1，SEQ ID NO2，SEQ ID NO3，SEQ ID NO4和SEQ ID NO5。在一些实施方案中，抗体或者抗原结合片段(a)抑制神经元生长椎的萎陷；(b)降低神经元内对于神经突向外生长和出芽的抑制；以及(c)抑制Nogo受体1与配基结合。在一些实施方案中，抗体或者抗原结合片段促进濒临死亡的神经元存活。在一些实施方案中，濒临死亡的神经元是动物(例如哺乳动物)的神经元。在一些实施方案中，神经突向外生长和出芽是轴突生长。在一些实施方案中，神经元是中枢神经系统神经元。在一些实施方案中，抗体或者抗原结合片段是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体或者抗原结合片段是小鼠抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体或者是单链抗体。在一些实施方案中，本专利技术提供杂交瘤细胞系，该细胞系选自HB 7E11(ATCC登录编号PTA-4587)，HB 1H2(ATCC登录编号PTA-4584)，HB 3G5(ATCC登录编号PTA-4586)，HB 5B10(ATCC登录编号PTA-4588)和HB 2F7(ATCC登录编号PTA-4585)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由该杂交瘤细胞生产。在一些实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
多肽，其选自ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４和ＳＥＱＩＤＮＯ：５。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：DHS李，RB佩平斯凯，W李，SA拉巴奇，JK雷尔顿，DS沃利，SM斯特里特马特，DYW赛赫，
申请(专利权)人：拜奥根IDEC马萨诸塞公司，耶鲁大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]