与p53结合的T细胞受体分子以及其用途制造技术

本发明专利技术提供一种Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）分子，它可以与衍生自ｐ５３蛋白质的肽结合，特别是人类ｐ５３蛋白质。该ＴＣＲ分子包含杂二聚分子以及单链分子，且该ＴＣＲ分子特异性地结合至显现于上下文的ＨＬＡ分子系统，特别是ＨＬＡ－Ａ２．１中的ｐ５３蛋白质的一个序列段，尤其是氨基酸２６４－２７３的位置。本发明专利技术还揭示了制造及使用这类ＴＣＲ分子的方法。本发明专利技术具有广泛的用途，包括治疗用途以及检测表达ｐ５３蛋白质的细胞的用途。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及能与特定p53蛋白质序列相结合的T细胞受体(TCR)分子，以及制造及使用这类分子的方法。本专利技术的TCR分子有各种用途，包括治疗以及诊断方面的用途。
技术介绍
传统上治疗例如癌症等疾病的方法包含手术、放射线、化学治疗、抗生素或组合治疗。然而，上述治疗方法对于这些指标的大多数还没有证实具有有效性。发展预防和/或治疗这类人类疾病的替代疗法十分重要。近年来，利用抗体及T-淋巴细胞的免疫疗法和基因疗法已成为治疗人类疾病的新方法，并且是很有发展前景的方法。这种治疗方法之一包括利用抗体使治疗或诊断试剂对特定目标进行瞄准。许多团体围绕利用抗体作为瞄准试剂这个课题形成了一些进展。这种进展包括对抗体融合蛋白质和抗体共轭分子的构造，将抗体连接到各种效应分子上，包括放射性分子、化学治疗剂、毒素、以及附加生物活性蛋白质。利用这类分子建立起来的治疗或诊断的设计是为了形成特定的效果，也就是连接了效应分子的抗体的目标效果。正如抗体已经发展为疗法，免疫系统的另外一种主要效应物，T细胞受体(TCR)，拥有作为疗法发展平台的独特优势。抗体仅限于识别血液及细胞外空间内的病原体，或者是细胞表面上的蛋白质目标，而T细胞受体可识别细胞表面上表达出MHC分子的抗原(包含衍生自细胞内蛋白质的抗原)。依照T细胞的亚型，可识别显示的抗原并变为活化状态，T细胞受体及承载T细胞受体的T细胞可参与控制各种免疫反应。例如，T细胞参与体液免疫反应的调节，通过诱导B细胞分化成抗体产生细胞来实现。此外，活化的T细胞可引起细胞为媒介的免疫反应。因此，T细胞受体可识别抗体不能发现的其它目标。T细胞反应通过抗原连接到T细胞受体(TCR)分子上进行调节。有一种类型的TCR是一种由外膜包裹的杂二聚体，它由类似于免疫珠蛋白的变异和恒定区域的α链及β链构成。该TCRα链包含以共价连接的Vα及Cα链，而该β链包含以共价连接到Cβ链上的Vβ链。该Vα及Vβ链形成一个口袋或裂口，这样就可以将超级抗原和抗原结合到主要组织兼容复合物系统中(MHC)(人类已知的是HLA复合物)。大体而言，参见Davis Ann.Rev.of Immunology 3537(1985)；Fundamental Immunology 3rd Ed.，W.Paul Ed.Rsen Press LTD.NewYork(1993)。人们相信TCR在免疫系统的发展和功能中起着重要的作用。例如，已报导该TCR可调停细胞死亡、增加B细胞繁殖、并影响各种紊乱症状的发展和严重性，这些紊乱症状包括癌症、过敏、病毒感染以及自体免疫障碍。已有报告指出人类p53是一种肿瘤抑制蛋白质，并且来自p53的肽表位具有特殊的I MHC类别的分子特征。进一步还有报告指出p53是广泛的有关肿瘤的毒害细胞的T-细胞(CTL)目标的候选成员。参见，例如，Theobald，M.et al.(1995)PNAS(USA)9211993以及本文所引用的参考文献。现已认可人类p53蛋白质的反常形式与各种癌症相关。其中一种看法就是异常或突变的p53蛋白质会湮没正常(野生型)p53蛋白质的保护特征。参见，例如Levine，A.J.et al.(1991)Nature(London)351453。已有文献描述了用于识别和具体连接衍生自人类p53蛋白质的肽的人类I类分子。其中一种分子就是HLA-A2.1。参见Theobald，M.etal。故人们期望得到可以识别和连接衍生自人类p53蛋白质的肽的TCR分子。特别期望得到杂二聚体及单链TCR分子，可特异性地结合至人类p53蛋白质的氨基酸位置264至272间的序列段。
技术实现思路
本专利技术人已识别出可与衍生自人类p53蛋白质的肽相结合的T-细胞受体(TCR)分子。一方面，本专利技术人已分离出杂二聚体的TCR分子，它可以特异性地连接出现在HLA分子系统(尤其是HLA-A2.1)中，人类p53蛋白质的优选氨基酸位置264至272之间的序列段。另一方面，本专利技术人还制得了专门连接同一序列的单链TCR(sc-TCR)分子。本专利技术还揭示了制造及使用这种TCR分子的方法。本专利技术具有广泛的应用，包含治疗用途及检测具有p53蛋白质的细胞的用途。根据本专利技术的TCR分子通常为杂二聚体或单链分子，它可结合人类p53分子的优选为氨基酸位置264至272间的序列。最佳的序列为Leu Leu Gly Arg Ash Ser Phe Glu Val(SEQ ID NO.1)的表位，其位置为人类p53分子的氨基酸位置264至272之间的范围。其它合适的p53序列如下述。特定的TCR分子具有各种用途的特征。例如本文所揭示的杂二聚体TCR分子可用于检测表达p53蛋白质的细胞，尤其是在出现适当抗原的复合物系统中。对这种复合物的举例说明就是一种灵长类的I类主要组织兼容复合物(MHC)，它结合并出现在p53蛋白质的CTL免疫相关的局部。优选的MHC I类分子为如下揭示的人类HLA-A2.1复合物。本专利技术包括各种杂二聚体的TCR分子，其所在的系统通常是预先确定的，以符合所需的用途。例如，于一具体实施例中，杂二聚体TCR分子表达为细胞表面分子位于转染或基因重组的细胞上。该细胞的实例如下述。此外，合适的杂二聚体TCR分子以更易于溶解的形式给出，例如，该杂二聚体包含下述一种或多种免疫球蛋白(Ig)序列。本专利技术更特别的杂二聚体TCR分子是以α链及β链为特征，这些链彼此之间通常由一个或多个共价键连接。最好，这些共价键包含一或多个双硫键连接。更优选的，杂二聚体包含至少一个Vα链和至少一个Vβ链，这些链最好构造在有效位置，位于杂二聚体键合缝隙内或附近，序列段大约为人类p53分子的氨基酸位置264到272的范围，优选氨基酸位置264-272。短语“有效位置”的意思是指根据本专利技术(杂二聚体和单链形式)TCR V链与p53的特定序列结合，按照本文所揭示的标准分析法，包括优选的T细胞结合方式以及下述ELISA测试。该杂二聚体TCR的特定V链包含以共价连接至C-α链的V-α链和以共价连接至C-β链的V-β链。在大多数具体实施例中，C-α链及C-β链各自独立地连接到适当的细胞跨膜结构区域，这个结构区域通常进一步地独立连接到适当的细胞质区域。例如，在需要一种可溶性杂二聚体分子的情况下，至少最好去除跨膜区域或最佳是去除整个跨膜区域，例如采用标准重组DNA的手段。本专利技术的特征还有其它有用的TCR分子，包含本文所揭示的单链T细胞受体(sc-TCR)分子。一般，这些分子包含至少一个Vα链连接到至少一个Vβ链，通过至少一个肽序列。若需要，该sc-TCR可进一步包含至少一个Cα链的部分，并且可选至少一个Cβ链部分。在本专利技术更具体的实施例中，该sc-TCR将包含大约一个Vα链连接到大约一个Vβ链，通过至少一个肽连接序列。sc-TCR中任何V或C序列的排列通常并不重要，只要达到了目标连接结果。然而，通常最好Vα及Vβ链要足够，可以有效连接到人类p53序列段上，大约是按照标准连接测试确定的氨基酸264-272的位置。本专利技术给出了重要的优点。例如，杂二聚体及单链TCR首次提供了可辨识及结合到一种重要的p53表位序列上的TCR分子。本专利技术的分子通过结合至该序列提供了对于癌症或癌症前细胞中的p53肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的Ｔ细胞受体（ＴＣＲ），包括Ｖα及Ｖβ链，该Ｔ细胞受体可与ＭＨＣ分子中的ｐ５３肽结合。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：LA舍曼，KF卡德，JA韦丹兹，HC王，EL汤姆森，
申请(专利权)人：阿尔特生物科学公司，斯克里普斯研究院，
类型：发明
国别省市：US[美国]