融合蛋白质制造技术

本发明专利技术提供了与特定ＩｇＧ４－Ｆｃ衍生物融合的活性治疗肽。这些融合蛋白质具有增加的半寿期、降低的半抗体形成和降低的效应子活性，而无免疫原性。所述融合蛋白质可用于治疗人类疾病以及多种其他病症或疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及异源融合蛋白质，其包含活性治疗肽和具有延长活性治疗肽的体内半寿期作用的免疫球蛋白的恒定重链(Fc)部分。这些异源融合蛋白质可用于治疗人类疾病以及多种其他病症或疾病。许多活性治疗肽在治疗多种疾病的临床试验中很有前景。然而，使用这些肽的治疗有用性由于许多肽活性差，在体内迅速被清除或者具有非常短的体内半寿期的事实受到局限。已经进行多种方法以在保持生物活性同时延长这些肽的清除半寿期或减少身体中这些肽的清除。一种方法包括融合活性治疗肽与免疫球蛋白的恒定重链(Fc)部分。免疫球蛋白一般在体内具有长的循环半寿期。例如IgG分子在人类中具有长达23天的半寿期。免疫球蛋白的Fc部分部分地与此体内稳定性相关。这些异源融合蛋白质在保持该肽稳定性的同时具有免疫球蛋白的Fc部分提供的稳定性。虽然此方法对肽治疗法是可行的(见WO 02/46227)，但是会考虑半抗体形成、不需要的效应子功能、糖基化位点和异质性表达。本专利技术探索通过鉴定和替换在所述分子的Fc部分中多个位置上的氨基酸从而减少半抗体形成和减轻或消除效应子功能来克服这些问题。另外，本专利技术还提供了鉴定和替换在所述分子的Fc部分中多个位置上的氨基酸从而使得所述分子在表达期间中不具有糖基化位点并具有降低的异质性的方法。此外，希望鉴定和替换在所述分子的Fc部分中多个位置上的氨基酸从而在异源融合蛋白质的反复和长期施用之后不诱导免疫应答。本专利技术的化合物包括含有与免疫球蛋白的Fc部分融合的活性治疗肽的异源融合蛋白质，其中所述的免疫球蛋白的Fc部分包含SEQ ID NO1Xaa1-Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Pro-Cys-Pro-Ala-Pro-Xaa16-Xaa17-Xaa18-Gly-Gly-Pro-Ser-Val-Phe-Leu-Phe-Pro-Pro-Lys-Pro-Lys-Asp-Thr-Leu-Met-Ile-Ser-Arg-Thr-Pro-Glu-Val-Thr-Cys-Val-Val-Val-Asp-Val-Ser-Gln-Glu-Asp-Pro-Glu-Val-Gln-Phe-Asn-Trp-Tyr-Val-Asp-Gly-Val-Glu-Val-His-Asn-Ala-Lys-Thr-Lys-Pro-Arg-Glu-Glu-Gln-Phe-Xaa80-Ser-Thr-Tyr-Arg-Val-Val-Ser-Val-Leu-Thr-Val-Leu-His-Gln-Asp-Trp-Leu-Asn-Gly-Lys-Glu-Tyr-Lys-Cys-Lys-Val-Ser-Asn-Lys-Gly-Leu-Pro-Ser-Ser-Ile-Glu-Lys-Thr-Ile-Ser-Lys-Ala-Lys-Gly-Gln-Pro-Arg-Glu-Pro-Gln-Val-Tyr-Thr-Leu-Pro-Pro-Ser-Gln-Glu-Glu-Met-Thr-Lys-Asn-Gln-Val-Ser-Leu-Thr-Cys-Leu-Val-Lys-Gly-Phe-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ile-Ala-Val-Glu-Trp-Glu-Ser-Asn-Gly-Gln-Pro-Glu-Asn-Asn-Tyr-Lys-Thr-Thr-Pro-Pro-Val-Leu-Asp-Ser-Asp-Gly-Ser-Phe-Phe-Leu-Tyr-Ser-Arg-Leu-Thr-Val-Asp-Lys-Ser-Arg-Trp-Gln-Glu-Gly-Asn-Val-Phe-Ser-Cys-Ser-Val-Met-His-Glu-Ala-Leu-His-Asn-His-Tyr-Thr-Gln-Lys-Ser-Leu-Ser-Leu-Ser-Leu-Gly-Xaa230(SEQ ID NO1)的序列，其中1位的Xaa为Ala或不存在；16位的Xaa为Pro或Glu；17位的Xaa为Phe、Val、或Ala；18位的Xaa为Leu、Glu、或Ala；80位的Xaa为Asn或Ala；以及230位的Xaa为Lys或不存在。本专利技术的肽部分和Fc部分直接或由接头融合在一起。接头的实例为具有序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO2)的富G的肽接头。其他接头的实例包括但不限于Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(1.5L)(SEQ ID NO4)、Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(2L)(SEQ ID NO6)、Asp-Ala-Ala-Ala-Lys-Glu-Ala-Ala-Ala-Lys-Asp-Ala-Ala-Ala-Arg-Glu-Ala-Ala-Ala-Arg-Asp-Ala-Ala-Ala-Lys(SEQ ID NO7)和Asn-Val-Asp-His-Lys-Pro-Ser-Asn-Thr-Lys-Val-Asp-Lys-Arg(SEQ ID NO8)。将肽部分的C端和Fc部分的N端融合到一起。备选地，将肽部分的N端部分和Fc部分的C端融合到一起。此外，将肽部分的C端与Fc部分的N端融合并且将另一肽分子的N端与Fc部分的C端融合得到肽-Fc-肽融合蛋白质。本专利技术还包括编码本专利技术异源融合蛋白质的多核苷酸以及包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本专利技术也包括治疗患有人类疾病以及多种其他病症或疾病的患者的方法，其包括施用异源融合蛋白质。本专利技术的异源融合蛋白质包含活性治疗肽部分和Fc部分。Fc部分包含人IgG4序列的替换，其与未和Fc序列融合的活性治疗肽相比为异源融合蛋白质提供增加的体内稳定性。本专利技术的异源融合蛋白质含有来自人类IgG4，但是与野生型人类序列相比包括一个或多个替换的Fc部分。如此处所使用，免疫球蛋白的Fc部分具有免疫学领域通常赋予该术语的意义。该术语尤其指不含有来自该抗体两个抗原结合区(Fab片段)的抗体片段。Fc部分由通过非共价相互作用和二硫键结合的抗体的两个重链恒定区组成。Fc部分可以包含铰链区，并经CH2和CH3结构域延伸到抗体C末端。Fc部分还可以包含一个或多个糖基化位点。有五种类型的具有不同效应子功能和药物动力学特性的人类免疫球蛋白。IgG是五种类型中最稳定的，在人体具有约23天的血清半寿期。有四个IgG亚类(G1、G2、G3和G4)，各亚类具有称作效应子功能的不同生物学功能。这些效应子功能通常由与Fc gamma受体(FcγR)的相互作用或通过结合补体1(C1q)亚成分介导，其中所述的补体1亚成分识别并结合免疫球蛋白G或免疫球蛋白M的重链，启动经典补体途径。与FcγR的结合可以导致抗体依赖细胞介导的细胞裂解，而与补体因子的结合可以导致补体介导的细胞裂解。在仅利用Fc部分延长本文档来自技高网...

【技术保护点】
异源融合蛋白质，其包含与免疫球蛋白的Ｆｃ部分融合的活性治疗肽，所述免疫球蛋白的Ｆｃ部分包含ＳＥＱＩＤＮＯ：１Ｘａａ↓［１］－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ↓［１６］－Ｘａａ↓［１７］－Ｘａａ↓［１８］－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｇｌｕ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｇｌｎ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｔｒｐ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｎ－Ｐｈｅ－Ｘａａ↓［８０］－Ｓｅｒ－Ｔｈｒ－Ｔｙｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－Ａｓｐ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ－Ｃｙｓ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ａｓｎ－Ｇｌｎ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ａｓｎ－Ａｓｎ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｔｈｒ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ｇｌｎ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ｈｉｓ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｈｉｓ－Ａｓｎ－Ｈｉｓ－Ｔｙｒ－Ｔｈｒ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｘａａ↓［２３０］（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）　的序列，其中：１...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：W格莱斯纳，RL小米利肯，Y甸，SHR奇昂，AM维克，
申请(专利权)人：伊莱利利公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]