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一种预防和治疗日本血吸虫感染的相关基因和蛋白质及其用途制造技术

技术编号:1717914 阅读:200 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种杀灭日本血吸虫童虫及预防、治疗日本血吸虫感染的蛋白质序列和相应基因序列及其用途。该蛋白质系利用亲和层析法、聚丙烯酰氨凝胶电泳、透析、冷冻干燥和蛋白质氨基端测序,从东方田鼠血清中分离得到血清白蛋白。利用聚合酶链式反应技术,获得东方田鼠血清白蛋白基因序列。将该基因以及修饰后的突变体插入真核表达载体,导入动物体内,可用于日本血吸虫感染的基因预防和治疗。可利用基因工程技术,生产东方田鼠血清白蛋白及其突变体,用于血吸虫病的预防和治疗。通过建立转基因动物,使疫区动物对日本血吸虫产生永久性抗性,阻断日本血吸虫的传播和血吸虫病的蔓延。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
东方田鼠血清白蛋白系利用亲和层析法、聚丙烯酰氨凝胶电泳、透析、冷冻干燥,从东方田鼠长江亚种和宁夏指名亚种血清中分离得到。东方田鼠白蛋白对在体外培养的日本血吸虫童虫有明显的杀灭作用,对在体内接种血吸虫尾蚴的小白鼠有明显的预防和治疗作用。   将成年东方田鼠用乙醚麻醉,眼框取血。血液收集于试管中,冰箱4℃过夜,使血液凝固。血液凝固后,3000转/每分钟,离心5分钟,收集血清。东方田鼠血清用缓冲液Ⅰ(0.05MKH↓[2]PO↓[4],pH7.0)按1∶1稀释,经10 000rpm离心去除不溶性物质后,上样于蓝色琼脂糖凝胶FF亲和层析柱顶部。层析柱用缓冲液Ⅰ洗脱,以去除未结合蛋白质。随后用缓冲液Ⅱ(0.05MKH↓[2]PO↓[4],1.5MKCl,pH7.0)对血清白蛋白进行洗脱,收集洗脱液。透 析袋(透析分子量8000~14000kDa)用缓冲液Ⅰ透析平衡24小时(其间换液至少3次)。将含有血清白蛋白的洗脱液置于透析袋内,4℃对水充分透析去盐3天(其间换液至少6次),真空冷冻干燥。用12%SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳,对纯化的白蛋白进行纯度鉴定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:胡维新邬国军秦志强
申请(专利权)人:中南大学
类型:发明
国别省市:43[中国|湖南]

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