犬类精液稀释液制造技术

本发明专利技术涉及一种犬类精液稀释液，属于动物繁殖技术领域。由Ｎ－乙酰基－Ｄ－葡萄糖胺０．０１～０．１０克、果糖和／或葡萄糖０．５５～３．８５克、柠檬酸０．８５～２．５０克、三羟甲基胺基甲烷１．１０～３．９０克、乙二胺四乙酸０．０５～１．００克、杀菌剂１０００ＵＩ／毫升，加蒸馏水至１００毫升配制而成，稀释液ｐＨ值为６．１５～６．９５，渗透压为３１０～３５０ｍＯｓｍｏ／Ｌ。本发明专利技术的稀释液能够有效延长低温或常温条件下犬类精子的存活时间，有利于维持犬类精子的质膜完整性及顶体完整性，提高犬类人工授精的受孕率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种犬类精液稀释液，用于犬类精液稀释后常温或低温体外保存以及饲养犬类的人工授精，属于动物繁殖

技术介绍
犬是人类的朋友，尤其是宠物犬——风姿倬约、体态玲珑，所以宠物犬成为大自然美的精灵，为人类所崇尚，为人类所喜爱。我国城乡居民随着经济条件的改善，饲养宠物的人越来越多，人们已经意识到饲养宠物犬所带来的巨大经济效益，已把人工饲养宠物犬作为一种新兴饲养业来发展，宠物犬除了进入人类的物质生活外，逐渐进入人类的精神生活。目前国内各地区已经广泛开展了犬类的人工养殖，现有宠物犬上亿只。我国犬的品种不仅以特有的使用和观赏价值著称于世界，而且对世界著名品种的形成产生过重要的影响，如西藏的马士迪夫(獒)、西施犬、北京犬、西藏拉萨犬(埃普索犬)等，作为珍贵犬的品种资源，已经成为世界人民的共同财富。然而在犬类长期养殖过程中，由于饲养及人工繁殖的条件限制，特别是杂交育种技术的条件限制直接导致我国人工饲养的犬类品种质量退化，在国际宠物犬市场上逐渐失去竞争力，给养犬者造成了巨大的经济损失，严重阻碍我国犬类饲养业的发展。在世界宠物犬市场中可以发现，名贵犬种正以其独特的身价、良好的开发前景逐渐被人们所接受，优质宠物犬将以它高品质受到更多人的青睐。随着人类饲养技术、繁殖水平的提高，宠物饲养种类越来越多。同我国饲养的犬类相比，国外犬类品种繁多、质量较高，尤其是新型品种价格昂贵。其主要原因是人工繁殖技术的应用，通过人工授精技术杂交改良原有自繁犬类品种，既能克服不同品种间自然交配难题，又能通过杂交优势培育出新型品系，产生良好的经济效益。因此，如何进一步保存、利用、开发我国的犬种资源，是一项非常重要的研究课题，深入开展此方面的研究工作，必将对我国的社会、经济、生活产生难以估量的积极作用。人工授精繁殖技术包括利用稀释后的鲜精液和解冻后的冻精输精两种方式。当前国内犬类养殖中普遍采用鲜精进行人工授精繁殖，繁殖过程中多半是直接利用鲜精进行人工授精，而没有经过稀释液的稀释，这种方法只是克服不同品系之间交配困难的弊端，而没有达到充分利用种公犬的目的，同时在繁殖效果方面亦不是很理想，严重影响犬类杂交育种的进程。目前国内还未见有关犬类精液液稀释的研究报导，而国外也只限于犬类精液冷冻稀释液的研究报导配方一葡萄糖(0.033M)、果糖(0.033M)、氨基乙酸(0.0625M)、柠檬酸(0.0385M)、磺胺(0.1M)青霉素(1000IU/ml)蒸馏水(定容为100ml)。用此配方稀释犬类鲜精液并进行超低温冷冻保存，精子复苏后冻融精子活力为0.52，质膜完整率和顶体完整率均能达到58％。(Yu et al，Cryobiology.2002，44(1)62-78.)。配方二三羟甲基胺基甲烷(240mM)、柠檬酸(63mM)、果糖(70mM)、蒸馏水(定容为100mL)、青霉素(1000IU/ml)。用此配方稀释犬类鲜精液并进行超低温冷冻保存，精子复苏后冻融精子活力为0.5，质膜完整率和顶体完整率均能达到55％。(Yildiz et al，Theriogenology.2000，54(4)579-85.)。N-乙酰基-D-葡萄糖胺(N-acetyl-D-glucosamine)是几丁质的主要成分，存在于昆虫和甲壳动物的外骨骼中，属于多糖同聚物，在细胞外表层、细胞间隙及结缔组织形成时提供主要的结构成分，使动植物组织有弹性和韧性。Breborowicz等报道N-乙酰基-D-葡萄糖胺通过人体腹膜细胞和成纤维细胞能有效激活体内葡萄胺聚糖的合成(Breborowicz等，1998，Adv.Perit.Dial.14，31-35.)。另据报道，N-乙酰基-D-葡萄糖胺已成功应用于猪精液冷冻稀释液中(Yi等，2002，Animal Reproduction Science.74，187-194.)，但关于N-乙酰基-D-葡萄糖胺在犬类精液稀释液方面的研究目前还没有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种犬类精液稀释液，使之能有效延长常温或低温条件下犬类精子的存活时间，有利于维持犬类精子的质膜完整性及顶体完整性，提高犬类人工授精的受孕率。为实现这样的目的，本专利技术的犬类精液稀释液采用了细胞培养液成分N-乙酰基-D-葡萄糖胺，同时添加果糖、葡萄糖、三羟甲基胺基甲烷(Tris)、柠檬酸、乙二胺四乙酸等各种成分，用蒸馏水配制而成。本专利技术配制的犬类精液稀释液具体包含如下成分N-乙酰基-D-葡萄糖胺 0.01～0.10克果糖和/或葡萄糖 0.55～3.85克柠檬酸 0.85～2.50克三羟甲基胺基甲烷1.10～3.90克乙二胺四乙酸0.05～1.00克杀菌剂 1000UI/毫升蒸馏水加至100毫升。稀释液pH值为6.15～6.95，渗透压为310～350mOsmo/L。本专利技术所述杀菌剂可选择青霉素或庆大霉素，也可以为其他具有杀菌作用的抗生素。优选的稀释液(1)含有如下成分N-乙酰基-D-葡萄糖胺 0.08克果糖1.35克柠檬酸 1.80克三羟甲基胺基甲烷3.38克乙二胺四乙酸0.16克青霉素或庆大霉素1000UI/毫升加蒸馏水至100毫升。稀释液pH值为6.65，渗透压为325mOsmo/L。优选的稀释液(2)含有如下成分N-乙酰基-D-葡萄糖胺 0.06克葡萄糖 2.85克柠檬酸 1.45克三羟甲基胺基甲烷 2.48克乙二胺四乙酸 0.23克青霉素或庆大霉素 1000UI/毫升加蒸馏水至100毫升。稀释液pH值为6.85，渗透压为320mOsmo/L。优选的稀释液(3)含有如下成分N-乙酰基-D-葡萄糖胺0.05克果糖 1.08克葡萄糖 0.75克柠檬酸 1.03克三羟甲基胺基甲烷 2.10克乙二胺四乙酸 0.15克青霉素或庆大霉素 1000UI/毫升加蒸馏水至100毫升。稀释液pH值为6.60，渗透压为335mOsmo/L。本专利技术的稀释液可按本领域的常规方法配制，按所述含量分别加入上述成分，再加蒸馏水，配成100毫升溶液即可。配制成的稀释液pH值为6.15～6.95，渗透压为310～350mOsmo/L，可为犬类精子体外存活提供最佳基质条件。本专利技术的犬类精液稀释液中的果糖、葡萄糖成分为精子在体外代谢的能量来源，三羟甲基胺基甲烷、柠檬酸及乙二胺四乙酸可维持稀释液环境与精子内环境的渗透压平衡。此外，在本专利技术的稀释液中还加入青霉素或庆大霉素(1000UI/毫升)等杀菌剂，提高稀释液的常温及低温保存效果。本专利技术使用由N-乙酰基-D-葡萄糖胺等多种成分组成的稀释液，犬类鲜精液稀释后在5℃、22℃条件下体外保存，并用稀释后的鲜精液进行人工授精，研究该稀释液对犬类精子存活时间精子质量及生产性能的影响，结果表明由N-乙酰基-D-葡萄糖胺等多种成分组成的稀释液，稀释犬类鲜精液体外保存时，能有效延长犬类精子的存活时间、保护精子质膜和顶体结构的完整性，表现出良好的精子保护作用。与现有技术相比，本专利技术的稀释液具有如下优点1、能够有效延长常温(22℃)条件下犬类精子的存活时间，提高犬类精子体外保存的质量，提高人工授精的受孕率；2、能够有效延长低温(5℃)条件下保存犬类精子的存活时间，延长稀释后精子的寿命，提高精子质膜完整本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种犬类精液稀释液，其特征在于由Ｎ－乙酰基－Ｄ－葡萄糖胺０．０１～０．１０克，果糖和／或葡萄糖０．５５～３．８５克，柠檬酸０．８５～２．５０克，三羟甲基胺基甲烷１．１０～３．９０克，乙二胺四乙酸０．０５～１．００克，杀菌剂１０００ＵＩ／毫升，加蒸馏水至１００毫升配制而成，稀释液ｐＨ值为６．１５～６．９５，渗透压为３１０～３５０ｍＯｓｍｏ／Ｌ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李新红，华修国，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]