一种耐热酪氨酸蛋白磷酸酶及其分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种从金龟子绿僵菌菌株ＣＱＭａ１０２中诱导产生的耐热酪氨酸蛋白磷酸酶及其分离纯化方法。它是采用特殊诱导培养基诱导培养该金龟子绿僵菌以形成所述的酶，并加以分离纯化制得。制得的酶蛋白是糖蛋白，能特异性水解蛋白中酪氨酸上的磷酸根基团，具有活性高、底物专一性高的特点，分子量８２．５ｋＤａ，等电点９．５，热稳定性好，在７０℃条件下能４ｈ保持酶活性不变；Ｎ－乙基马来酰亚氨、钼酸盐、钒酸盐和二价锌离子等都能特异性抑制该酶的活性，而冈田酸和氟化物对其酶活性没有明显影响，可以作为生化试剂。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种耐热酪氨酸蛋白磷酸酶，它能在ｐＨ５．５，７５℃条件下特异性水解蛋白中酪氨酸上的磷酸根基团，并具有如下的物理化学特性：（１）分子量：在十二烷基磺酸钠变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上约为８２．５ｋＤａ；（２）等电点：在５％的天然聚丙 烯酰胺凝胶等电聚焦电泳上约为９．５；（３）最适反应温度和最佳反应ｐＨ：在酪氨酸上含有磷酸基团的所有蛋白都是该酶蛋白的底物，其最适反应温度为７５±１℃，最佳ｐＨ为５．５±０．５；（４）热稳定性：此酶蛋白在７０℃温育２４０ｍｉｎ 对酶活性没有明显影响，当孵育温度为８０℃时，随着孵育时间延长酶活性直线下降，当温度超过９０℃时，酶活性迅速丧失；（５）抑制剂：Ｎ－乙基马来酰亚氨、钼酸根、钒酸盐和二价锌离子都是此酶蛋白的特异抑制剂；（６）酶动力学特性：此酶蛋 白的米氏常数Ｋ↓［ｍ］为１．２７３±０．０８３ｍＭ，最大酶促反应速度Ｖ↓［ｍａｘ］为８．７２±０．１２μｍｏｌ．ｍｉｎ↑［－１］．ｍｇ↑［－１］；其中所述酶是从绿僵菌属（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）金龟子绿僵菌Ｃ ＱＭａ１０２（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍａｎｉｓｏｐｌｉａｅｖａｒ．ａｃｒｉｄｕｍＣＱＭａ１０２），保藏编号为ＣＧＭＣＣＮｏ．０８７７中提取制得。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏玉先，李振轮，王中康，殷幼平，彭国雄，
申请(专利权)人：重庆大学，重庆重大生物技术发展有限公司，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]