靶向抗肺癌SOD的构建与表达的方法技术

本发明专利技术公开了一种ｐＥＴ－ＳＯＤ工程菌的构建及其表达纯化方法，本发明专利技术通过下述技术方案予以实现：设计引物从含念珠藻ＣＨＥＮ　　Ｆｅ－ＳＯＤ的ｐＥＴ－ＳＯＤ质粒中扩增获得Ｆｅ－ＳＯＤ基因；设计引物从含ＳｃＦｖ的Ｔ－ＳｃＦｖ质粒扩增获得ＳｃＦｖ基因；酶切Ｆｅ－ＳＯＤ基因和ＳｃＦｖ基因后重组得到ＳＯＤ－ＳｃＦｖ融合基因，并重组进ｐＥＴ２８ａ（＋）质粒载体，构建得到Ｐｅｔ－ＳＯＤ－ＳｃＦｖ融合载体，转化至感受态大肠杆菌ＢＬ２１，得到Ｐｅｔ－ＳＯＤ－ＳｃＦｖ工程菌；加入ＩＰＴＧ和Ｆｅ↑［３＋］诱导，ＳＯＤ－ＳｃＦｖ获得表达。利用本发明专利技术，ＳＯＤ－ＳｃＦｖ获得高效表达，提高了ＳＯＤ对肿瘤细胞的识别、定位和透膜能力。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种抗肺癌ＳＯＤ的构建的方法，其特征在于依次包括以下步骤：（１）从含念珠藻ＣＨＥＮＦｅ－ＳＯＤ（ＮｏｓｔｏｃｃｏｍｍｕｎｅｓｔｒａｉｎＣＨＥＮＦｅ－ＳＯＤ）的ｐＥＴ－ＳＯＤ质粒中ＴＤ－ＰＣＲ扩增获得Ｆｅ－ＳＯＤ基 因；ＴＤ－ＰＣＲ扩增所用引物：ＳＯＤ－Ｎｃｏ：５’－ＣＡＴＧＣＣＡＴＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＣＡＧＣＴＣＣＣＡＣＴＡＣＣＣＴＴＴＧ含ＮｃｏＩ位点，ＳＯＤ－Ｓａｌ：５’－ＧＣＧＴＣＧＡＣＴＣＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＧＣＴ ＴＴＧＧＣＣＡＡＧＴＴＴＴＣ含ＳａｌＩ位点，引物ＳＯＤ－Ｓａｌ去除Ｆｅ－ＳＯＤ基因序列３’端的ＴＡＡ终止密码子，并在其末端加上编码ＧＧＧＧ的密码子，即：ＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡ；（２）以含ＳｃＦｖ的Ｔ－ＳｃＦｖ质粒为模板 ＴＤ－ＰＣＲ扩增获得ＳｃＦｖ基因；ＴＤ－ＰＣＲ扩增所用引物：ＳｃＦｖ－Ｓａｌ：５’－ＡＣＧＣＧＴＣＧＡＣＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧ含ＳａｌＩ位点，ＳｃＦｖ－Ｎｏｔ：５’－ＡＴＡＡＧＡＡＴＧＣＧＧＣＣ ＧＣＣＴＡＴＴＴＧＡＴＣＴＣＧＡＧＣＴＴＧＧＴＣ含ＮｏｔＩ位点；引物ＳｃＦｖ－Ｎｏｔ末端含ＴＡＧ终止密码子；（３）以ＮｃｏＩ，ＳａｌＩ酶切步骤（１）得到的Ｆｅ－ＳＯＤ基因；（４）以ＳａｌＩ，Ｎｏｔ Ｉ酶切步骤（２）得到的ＳｃＦｖ基因；（５）将步骤（３）和（４）得到的基因重组得到ＳＯＤ－ＳｃＦｖ融合基因，并重组进经ＮｃｏＩ，ＮｏｔＩ酶切的ｐＥＴ２８ａ（＋）质粒载体，控制此融合基因５’端与Ｔ７启动子之间的距离，构建得到Ｐｅ ｔ－ＳＯＤ－ＳｃＦｖ融合载体；（６）将Ｐｅｔ－ＳＯＤ－ＳｃＦｖ融合载体转化至感受态大肠杆菌ＢＬ２１，命名为Ｐｅｔ－ＳＯＤ－ＳｃＦｖ工程菌。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：龚兴国，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]