一种ＡＴ选择性高频率诱变的方法技术

本发明专利技术公开了一种ＡＴ选择性高频率诱变方法。其步骤包括以ｄＵＴＰ为媒介进行第一轮ＰＣＲ扩增，得到含ｄＵＭＰ的杂合ＤＮＡ分子；以该ＤＮＡ分子为模板，进行第二轮ＰＣＲ扩增；通过部分Ｕ与Ｇ配对，获得ＡＴ碱基分别被ＧＣ替换的突变ＤＮＡ分子或者在第一轮ＰＣＲ扩增后，以含有ｄＵＭＰ的杂合ＤＮＡ分子为模板，在０．５ｍＭ　　Ｍｇｃｌ↓［２］存在下进行在第二轮ＰＣＲ扩增，获得高突变频率的ＤＮＡ分子。本发明专利技术的ＡＴ选择性诱变方法突变频率为０．８６％．其中ＡＴ转换为其它碱基数占总突变碱基数的９６．５％；高频率诱变方法的突变率为４．０％。其中ＡＴ转换为其它碱基数占总突变碱基的９０．４％。本发明专利技术的方法可用于ＤＮＡ分子的体外改良。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种ＡＴ选择性高频率诱变的方法，其特征在于，以ｄＵＴＰ为媒介进行第一轮ＰＣＲ，得到含ｄＵＭＰ的杂合ＤＮＡ分子；以该ＤＮＡ分子为模板，进行第二轮ＰＣＲ；通过部分Ｕ与Ｇ配对，获得ＡＴ碱基分别被ＧＣ替换的突变ＤＮＡ分子。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘子铎，张炼辉，洪玉枝，喻子牛，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]