【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种海绵原细胞的分离纯化方法，其特征在于：可按如下步骤操作：（１）混合海绵细胞的制备：取新鲜洁净的健康海绵组织块，切割成１－１０ｍｍ↑［３］小块，振荡离散出海绵细胞，用２００～５００目筛网过滤，离心，留细胞沉淀用含ＥＤＴＡ的ＣＭＦＳ Ｗ重悬即为混合海绵细胞；（２）差速离心：将混合海绵细胞悬液进行低速离心，３００～８００ｒｐｍ，１０～３０ｍｉｎ，留取细胞沉淀，弃去上清；（３）差速聚集：将差速离心获得的细胞接种于ＣＭＦＳＷ中，使海绵细胞自由聚集形成细胞聚集体 ，弃去未参与聚集的游离细胞；（４）差速黏附：将细胞聚集体于人工海水中进行培养，细胞聚集体贴壁，海绵细胞聚集体贴壁铺展达最大程度后，用ＣＭＦＳＷ洗去ＡＳＷ，镜下观测应用含１～１０ｍＭＥＤＴＡ的ＣＭＦＳＷ先将原细胞离散下来，取出原细 胞离散液，并震荡进行充分离散；（５）密度梯度离心：配制密度梯度液，用２－５％的Ｆｉｃｏｌｌ和２０－４０％泛影葡胺配制密度从１．０１－１．１０ｇ／ｍｌ的梯度液，将步骤（４）所得细胞悬液铺于梯度液上，于５００－２０００ｒｐｍ，离心１０～ ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张卫，孙黎明，虞星炬，金美芳，赵权宇，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]
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