一种辣椒小孢子诱导获得胚状体的培养方法技术

本发明专利技术涉及一种辣椒小孢子诱导获得胚状体的培养方法，属于植物细胞工程领域。该方法通过确定试材、选取花蕾、花蕾预处理、制备液固两种培养基、两种培养基的灭菌与分装、花蕾消毒、无菌剥取花药、花药接种、花药培养、小孢子的自然游离和胚状体形成等步骤，获得了小孢子胚状体，且胚状体能正常生长，成苗率高。本发明专利技术从开始培养到获得胚状体一般需要８周时间。本发明专利技术若应用于育种实践，必将大大加快育种进程，显著地提高选择效果，节省大量人力、物力，是一项加速育种纯系选育的有效方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种辣椒小孢子诱导获取胚状体的培养方法，其特征在于包括以下步骤：（１）确定试材：选取具有综合优良性状的杂交一代辣椒品种作为试验材料；（２）选取花蕾：在开花初期或盛期，通过醋酸洋红压片法镜检选取处于单核靠边期的花蕾，其外观形态特征表现为花冠与花萼等长或花冠稍长于花萼，定期摘除已开放的花朵，让植株始终处于开花状态；（３）花蕾预处理：合适的花蕾用自封塑料袋盛装后置于４℃低温冰箱处理１～３天；（４）制备液体培养基和固体培养基：两种培养基所用的基本培养基均为ＮｉｔｓｃｈａｎｄＮｉｔｓｃｈ培养基，所用的碳源为麦芽糖，其浓度为２％～３％；固体培养基添加的凝固剂为琼脂，其浓度为０．６％～０．８％；固体培养基的组成成分为：在ＮｉｔｓｃｈａｎｄＮｉｔｓｃｈ培养基中，加入培养基重量的０．６％～０．８％琼脂，２％～３％的麦芽糖，０．５％～１．０％的活性炭，ｐＨ６．０；液体培养基的组成成分为：在ＮｉｔｓｃｈａｎｄＮｉｔｓｃｈ培养基中，加入２％～３％的麦芽糖，０．４～０．８ｍｇ／Ｌ的玉米素ＺＴ，０．５ｍｇ／Ｌ～１．０ｍｇ／Ｌ的吲哚乙酸ＩＡＡ，ｐＨ５．８；（５）培养基的灭菌与分装：固体培养基于１２１℃，１．１Ｍｐａ条件下灭菌２０分钟，液体培养基用装有两层微孔滤膜的塑料滤器过滤灭菌，保证培养基的无菌状态；灭菌后每一培养皿先注入固体培养基６ｍｌ，等固体培养基凝固后，再加入液体培养基３ｍｌ，进行分装；（６）花蕾消毒：先用流水冲洗３０分钟，再用体积分数７０％的酒精表面消毒３０秒钟，之后用体积分数５％的次氯酸钠消毒１２～１５分钟，然后用无菌水冲洗４次，每次５分钟；（７）无菌剥取花药：在无菌滤纸上用消过毒的镊子剥取花药，避免损伤、损坏花药，并把花丝去除干净；（８）花药接种：每一培养皿放入１２枚花药，用石蜡膜封口；（９）花药培养：培养皿置于培养箱中，在９℃条件下暗培养一周，后转入白天２５℃、夜间２０℃的组织培养室，继续暗培养；（１０）小孢子的自然游离胚状体形成：在液固双层培养系统下，花药漂浮在上层的液体培养基上，经过２～３周，花药正常裂开，把小孢子释放入培养基中；（１１）胚状体的发育形成：培养４周后，肉眼可见球型胚和心型胚，培养７周后，可见鱼雷型胚和子叶型胚，培养１０周后，子叶型胚非常明显，之后把子叶型胚转入胚萌发培养基上，形成完整植株。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：巩振辉，张菊平，刘珂珂，黄炜，李大伟，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：61[中国|陕西]