针对白介素-1受体的抗体及其应用制造技术

结合人ＩＬ－１Ｒ并且抑制人ＩＬ－１与ＩＬ－１Ｒ结合的抗体，其特征在于所述抗体可获自杂交瘤细胞系ＭＡＫ＜ｈ－ＩＬ－１ＲＩ＞２Ｄ８（ＤＳＭ　　ＡＣＣ　　２６０１）或是嵌合的、人源化的或Ｔ细胞表位缺失的抗体变体或所述抗体的片段，其在如ＭＲＣ５（ＡＴＣＣ　　ＣＣＬ　　１７１）的人成纤维细胞中对于ＩＬ－１介导的ＩＬ－８和ＩＬ－６分泌的抑制显示３５ｐＭ或更低的ＩＣ５０值，对于炎性疾病的治疗具有有利的性能。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利说明针对白介素-1受体的抗体及其应用 本专利技术涉及针对白介素-1受体(IL-1R)的抗体、它们的生产方法、包含所述抗体的药物组合物及其应用。 由于IL-1在炎性疾病中所发挥的重要作用以及涉及炎症和与类风湿性关节炎有关的关节破坏，由促炎细胞因子白介素-1(IL-1α和IL-1β)激活的信号转导途径已成为很多关注的焦点。 已经描述了许多蛋白质，其参与转录因子核因子κB(NF-κB)以及应激-活化的蛋白激酶如p38促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的受体后(post-receptor)活化。白介素-1受体(IL-1R，Swiss Prot.P14778，CD 121a)是该信号系统的一员，其为先天免疫和炎症应答的关键性决定因素。类风湿性关节炎的治疗方法在最近几年中，一部分由于对该病症严重程度的认识提高以及一部分由于对细胞因子在该疾病免疫发病机理中重要作用的理解的重大进展而经历了较大的发展转变。主要的焦点是基于以TNFα和IL-1为目标的理论。最近公开的研究证实一些以TNFα为目标的生物制剂的使用引起了类风湿病的症状和征候的持续改善，并且进一步证实TNFα阻断保护关节免于结构破坏。Anakinra是一种白介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)，其阻断IL-1介导的作用。 美国专利号6,511,665要求保护一种单克隆抗体，其特异性地结合人IL-1受体并且阻断IL-1与IL-1受体的结合。 本专利技术的目的是提供新的针对IL-1R的抗体，其是用于如类风湿性关节炎的炎性疾病治疗的有价值的方法。 专利技术概述 意外地发现存在针对IL-1R的抗体，其对于IL-1介导的IL-8分泌的抑制显示35pM或更低的IC-50值(在人胚胎肺成纤维细胞如MRC-5细胞中)。 本专利技术的抗体具有对天然和变性IL-1R特异的表位并且抑制IL-1结合IL-1R以及随后的信号转导(核因子κB(NF-κB)的激活)。抗体与糖基化形式的IL-1R的可溶性结构域结合并且显示300pM，优选200pM或更低的亲合力(KD)。对于与去糖基化的IL-1R的结合，抗体显示显著降低的亲和力。 本专利技术的抗体在体外和体内抑制IL-1结合IL-1R，由此抑制由IL-1、IL-1受体和IL-1Racp(白介素-1受体辅助蛋白；Q9NPH3)组成的三元复合物的形成。 本专利技术包括结合人IL-1R并且抑制人IL-1与IL-1R结合的抗体，其特征在于所述的抗体优选可获自杂交瘤细胞系MAK＜h-IL-1RI＞2D8(DSMACC 2601)或是嵌合的、人源化的或T细胞表位缺失的抗体变体或所述抗体的片段，其对于人成纤维细胞MRC5(ATCC CCL 171)中IL-1介导的IL-8分泌的抑制显示35pM或更低的IC-50值。 本专利技术的抗体优选不显示效应子功能(ADCC和CDC)并且因此是IgG4的同型。尤其优选的是丝氨酸228至脯氨酸的突变(Angal，S.，等.，Mol.Immunol.30(1993)105-108)。或者所述抗体是IgG1的同型并且优选在CH1和CH2之间约氨基酸220-240的铰链区中和/或在CH2和CH3之间约氨基酸330的第二个结构域间(inter-domain)区域中修饰(依照Kabat编号，参见例如Johnson，G，和Wu，T.T.，Nucleic Acids Res.28(2000)214-218)以避免效应子功能。IgG类别的转换可通过用来自所需类别的抗体(如IgG1或IgG4)的重链和轻链来交换所述抗体的恒定重链和轻链来容易地进行。这些方法是现有技术中众所周知的。 本专利技术的抗体对需要抗炎治疗的病人显示益处。本专利技术的抗体具有新的和创造性的性能，对患有上述疾病、尤其是患有类风湿性关节炎的患者产生益处。本专利技术的抗体其特征在于以上提及的性能。 进一步优选该抗体是大鼠来源的且包括按照Kabat的大鼠抗体的抗体序列框。优选Kabat序列中将氨基酸10(丝氨酸)从VL链(DEL10)缺失和/或VH链的氨基酸26(甘氨酸)变为谷氨酸(G26E)。优选抗体为利用WO 98/08097中所述的方法缺失T细胞表位的。 进一步优选IL-1R拮抗剂(Arend W.P.，J.Clin.Invest.88(1991)1445-1451)在高至100μM(IL-1R拮抗剂)的浓度下不抑制IL-1R(10nM)结合本专利技术的固定化抗体，即本专利技术的抗体与IL-1R的结合不受IL-1R拮抗剂的抑制。 恒定区优选为按照Kabat，E.(见下文)的人IgG1或人IgG4恒定区。优选的恒定区在附图说明图14、15和16中显示。 本专利技术还包括编码抗体的核酸。所编码的多肽能够与以下定义的各个其它抗体链装配在一起 抗体重链，包括作为CDR的SEQ ID NO1的CDR1(氨基酸45-54)、CDR2(氨基酸69-84)和CDR3(氨基酸117-123)，抗体轻链，包括作为CDR的SEQ ID NO2的CDR1(氨基酸43-57)、CDR2(氨基酸73-79)和CDR3(氨基酸112-120)。CDR编号和定义按照Kabat，E.(参见例如Johnson，G.，和Wu，T.T.，Nucleic Acids Res.28(2000)214-218)，包括信号序列。 优选地，所述核酸编码多肽，该多肽为由SEQ ID NO1的可变区(VH)组成的重链和由SEQ ID NO2的可变区(VL)组成的轻链。 抗体优选为单克隆抗体和，此外为嵌合抗体(人恒定链)、人源化抗体并且尤其优选为T细胞表位缺失的抗体。 该抗体与由SEQ ID NOs1-2的可变链表征的抗体竞争性地结合人IL-1R。 该抗体进一步表征为300pM或更低、优选200pM(KD)或更低以及更优选约70-200pM的亲合力。 本专利技术因此还包括选自上述本专利技术IL-1R抗体的重链的CDR1、CDR2、CDR3和轻链的CDR1、CDR2、CDR3的多肽以及编码核酸。 本专利技术进一步提供生产上述本专利技术拮抗性单克隆抗体的杂交瘤细胞系。 本专利技术优选的杂交瘤细胞系，杂交瘤细胞系MAK＜h-IL-1RI＞2D8根据用于专利程序的国际认可的微生物保藏布达佩斯条约，于2003年7月10日保藏在德意志微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH)(DSMZ)，德国，保藏号DSMACC 2601。 可获自所述细胞系的抗体为本专利技术的一种优选实施方案。优选的还有所有抗体，其可以由图7至10和14至16中所示的可变区和恒定区组合(combine)，并且在人成纤维细胞MRC5(ATCC CCL 171)中对于IL-1介导的IL-8分泌的抑制显示35pM或更低的IC-50值。这些序列是为了得到改进的抗体通过修饰抗体2D8的序列而获得的序列的实例，所述改进的抗体保持了抗体2D8的IC50和/或表位特征的优良性能。上述抗体中，来自图7和8(T细胞表位缺失的)或来自图9和10(人源化的)的轻链和重链与来自图14和图15或16的恒定区组合。尤其优选的为抗体DEI5/7、DEI4/7、DEI2/4、DEI5/4、DEI4/5、DEI5/5、HUM2/2、HUM2/3、DEI1/8本文档来自技高网...

【技术保护点】
与人ＩＬ－１Ｒ结合并且抑制人ＩＬ－１与ＩＬ－１Ｒ结合的抗体，其特征在于所述抗体可获自杂交瘤细胞系ＭＡＫ＜ｈ－ＩＬ－１ＲＩ＞２Ｄ８（ＤＳＭ　　ＡＣＣ　　２６０１）或者是嵌合的、人源化的或Ｔ细胞表位缺失的抗体变体或所述抗体的片段，其在人成纤维细胞如ＭＲＣ５（ＡＴＣＣ　　ＣＣＬ　　１７１）中对于ＩＬ－１介导的ＩＬ－８和ＩＬ－６分泌的抑制显示３５ｐＭ或更低的ＩＣ５０值。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：I巴特克，F卡尔，A基佐尼蒂，E欧吉，G费尔蒂希，A汉密尔顿，M兰岑德费尔，P吕格尔，R舒马赫，T特鲁伊特，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]