用植物DNA病毒沉默载体改变观赏植物叶色、花色的方法技术

本发明专利技术公开了一种用植物ＤＮＡ病毒沉默载体改变观赏植物叶色、花色的方法。该植物ＤＮＡ病毒沉默载体来自于中国番茄黄化曲叶病毒（Ｔｏｍａｔｏ　　ｙｅｌｌｏｗ　　ｌｅａｆ　　ｃｕｒｌ　　Ｃｈｉｎａ　　ｖｉｒｕｓ，简称为ＴＹＬＣＣＮＶ）的ＤＮＡ－Ａ及其相伴随的卫星分子－ＤＮＡβ，并在ＤＮＡβ的βＣｌ基因进行缺失，且在一缺失βＣｌ基因处插入单一多克隆位点。用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆观赏植物叶色、花色相关基因的ｃＤＮＡ片段，如Ｓｕ、ＣＨＳ、ＰＤＳ等基因片段，并插入ＴＹＬＣＣＮＶ病毒沉默载体的多克隆位点构建成观赏植物叶色、花色相关基因的重组病毒沉默载体，该病毒沉默载体通过农杆菌注射接种的方法诱导沉默观赏植物内源叶色、花色相关基因后改变观赏植物的花色、叶色，从而提高了植物的观赏性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用植物ＤＮＡ病毒沉默载体改变观赏植物叶色、花色的方法，其特征在于方法的步骤如下：１）提取感染ＴＹＬＣＣＮＶ病毒的烟草植物基因组总ＤＮＡ；２）用分子手段构建成ＴＹＬＣＣＮＶ病毒卫星分子ＤＮＡβ的缺失βＣｌ并带有单一多克隆位 点的侵染性克隆；３）根据ＧＥＮＢＡＮＫ中观赏植物叶色或花色相关基因的序列设计引物，用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆观赏植物叶色或花色相关基因的１７０－－１２００ｋｂ的ｃＤＮＡ片段，并将其插入上述ＴＹＬＣＣＮＶ病毒卫星分子ＤＮＡβ侵染性克隆的多 克隆位点处，构建成含植物叶色或花色基因ｃＤＮＡ片段的ＴＹＬＣＣＮＶＤＮＡβ的侵染性克隆；４）从感染ＴＹＬＣＣＮＶ病毒的烟草植物基因组总ＤＮＡ中分别用ＰＣＲ方法克隆０．７拷贝ＤＮＡ－Ａ和１．０拷贝ＤＮＡ－Ａ的ＤＮＡ片段，并插入ｐＧ ＥＭ－ＴＶｅｃｔｏｒ构建成ｐＧＥＭ－１．７Ａ质粒；从ｐＧＥＭ－１．７Ａ质粒酶切切下１．７拷贝的ＤＮＡ－Ａ片段并插入含植物叶色或花色基因ｃＤＮＡ片段的ＴＹＬＣＣＮＶＤＮＡβ侵染性克隆的多克隆位点，构建成含植物叶色或花色基因ｃＤＮＡ片段 的ＴＹＬＣＣＮＶ病毒沉默载体；５）将含植物叶色或花色基因ｃＤＮＡ片段的ＴＹＬＣＣＮＶ病毒沉默载体通过三亲交配的方法导入农杆菌，用该含病毒沉默载体的农杆菌注射接种观赏植物，诱导沉默观赏植物内源叶色或花色相关基因而改变观赏植物的花色或叶 色。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周雪平，陶小荣，钱亚娟，吴建祥，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]