一种不结球白菜游离小孢子培养技术制造技术

本发明专利技术涉及一种不结球白菜游离小孢子培养技术，属于生物技术领域，专用于不结球白菜游离小孢子培养。包括取材、消毒，接种小孢子密度为１×１０↑［５－６］个／ｍｌ，置于３５℃高温诱导２４～４８ｈ，２５℃黑暗条件下培养暗培养１５～２０ｄ、植株再生与继代培养、移栽，采用培养基中加入质量比０．１％的秋水仙素处理或在移栽时用质量比０．１％的秋水仙素浸泡幼根使得染色体加倍。应用此技术，诱导不结球白菜基因型成功率达６８．５％，平均每个花蕾诱导胚４～１０个，最高可达９２个以上。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种不结球白菜游离小孢子培养技术，包括：　　　　取材：选取处于单核晚期至双核早期的干净无污染花蕾，将花蕾保湿置于４℃冰箱中保存；　　　　消毒：选取花蕾用７５％的酒精消毒３０ｓ，然后用质量比为０．１％的ＨｇＣｌ↓［２］消毒５ｍｉｎ，最后用无菌水冲洗３次待用；　　　　接种：把消毒后的花蕾置于离心管中加入Ｂ５液体培养基用玻璃棒轻轻挤压使小孢子游离出来，用４００目虑网过滤，然后８００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ，弃上清，重复３次，最后加入ＮＬＮ液体培养基，使小孢子密度达到１×１０↑［５－６］个／ｍｌ，获得小孢子悬浮液；　　　　高温诱导：把小孢子悬浮液分装于培养皿中，立即置于３５℃高温下黑暗处理２４～４８ｈ；　　　　暗培养：将上述高温诱导处理后的小孢子悬浮液置于２５℃黑暗条件下培养，１５～２０ｄ后可以看到有胚状体出现；　　　　植株再生与继代培养：胚状体生长１５ｄ以后，挑选子叶型胚转于生芽培养基中培养，２５ｄ以后，转于生根培养基中生根；　　　　移栽：生根的试管苗移栽于营养钵中练苗，经过练苗以后，定植于大田；　　　　染色体加倍：采用在上述生芽培养基、生根培养基中分别加入质量比浓度为０．１％的秋水仙素处理使得染色体加倍，或者在移栽时采用质量比浓度为０．１％的秋水仙素浸泡幼根处理８ｈ使得染色体加倍。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：侯喜林，耿建峰，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]