抗真菌肽制造技术

本发明专利技术提供了抗真菌的和抗细菌的肽，特别是从昆虫（特别是鳞翅昆虫）中获得的抗真菌肽。本发明专利技术也提供了使用这些抗真菌肽治疗或预防真菌生长的方法，所述方法可以被用于各种目的，例如预防植物的真菌感染，治疗动物（特别是人）的真菌感染，和预防食物腐败变质。具体地，本发明专利技术提供了生产抗真菌肽的转基因植物，所述植物具有增加的抗真菌感染／生长的抗性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抗真菌肽，特别是从昆虫中获得的抗真菌肽，所述昆虫特别是鳞翅昆虫(lepidopterans)。本专利技术也提供了应用这些抗真菌肽治疗或预防真菌生长的方法，所述方法被用于各种目的，例如预防植物的真菌感染、治疗动物(特别是人类)的真菌感染、以及预防食物腐败变质。
技术介绍
真菌是真核细胞生物，它们可以有性或无性地繁殖，并且可以是双相形式的，其在自然环境是一种形式，而在感染宿主体内是另一种不同的形式。植物和动物的真菌感染都是农业、医学和食品生产/储存领域的重大问题。因为多种原因，真菌感染正成为主要的关注点，所述原因包括有限数目的可用的抗真菌剂、耐较老抗真菌剂的物种的发生率的增加、以及对机会性真菌感染高危的免疫缺陷患者人群的增长。人类的真菌病被称作霉菌病。一些霉菌病是地方性的，其中只在作为真菌的天然栖息地的地理区域内才会获得感染。这些地方性霉菌病通常是自限的，并且很少有症状。一些霉菌病主要是机会性的，出现于免疫缺陷患者体内，例如器官移植患者、进行化疗的肿瘤患者、烧伤患者、AIDS患者、或糖尿病酮症患者。真菌引起了多种植物疾病，例如但不限于霉变、腐烂、锈病、黑穗病、和枯萎病等。例如，土壤中所带有的真菌性植物病原体在农业和园艺业上都造成了巨大的经济损失。具体地，立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)是表现出强致病性的主要的真菌性植物病原体之一，它与多种植物物种及品种的幼苗性疾病及叶疾病例如种子腐烂、根部腐烂、猝倒病、叶和茎的腐烂有关，造成了巨大的经济损失。另一个实例是辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)，它是广泛分布的以及高度损害性的土壤传播真菌性植物病原体，它造成了辣椒(Capsicum annuum L.)的根部腐烂和根茎腐烂以及叶、果实和茎的气生性枯萎病。植物的真菌感染是潮湿气候中的特殊问题，它可以成为谷物储存中的主要问题。植物可以发育出某些程度的对致病性真菌的天然抗性，但是现代的生长方法、收获和储存系统时常给植物病原体提供良好的环境。抗真菌剂包括多烯衍生物，例如两性霉素B和结构相关的化合物如制霉菌素和匹马菌素。此外，已经从多种天然存在的来源中分离出了抗真菌肽(DeLucca and Walsh，1999)。但是，仍需要鉴定出更多的具有能在医学、农业和工业相关应用中所使用的抗真菌活性的化合物，以便控制和/或预防真菌生长。
技术实现思路
本专利技术者已经分离并表征了新的抗微生物肽，特别是抗真菌肽。因此，在本专利技术的第一个部分，提供了基本上纯化的肽，其包括选自以下一组的序列i)SEQ ID NO4所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO4具有至少60％相同性的氨基酸序列；iii)SEQ ID NO5所示的氨基酸序列；iv)与SEQ ID NO5具有至少80％相同性的氨基酸序列；v)SEQ ID NO48所示的氨基酸序列；vi)与SEQ ID NO48具有至少70％相同性的氨基酸序列；vii)SEQ ID NO53所示的氨基酸序列；viii)与SEQ ID NO53具有至少70％相同性的氨基酸序列；ix)i)到viii)中任一项的生物学活性片段；和x)包括i)到ix)中任一项的氨基酸序列的前体， 其中所述肽或其片段表现出抗真菌的和/或抗细菌的活性。在第一个部分的优选实施方式中，有关的肽与SEQ ID NO4、SEQ IDNO5、SEQ ID NO48或SEQ ID NO53所示的序列具有至少65％、更优选地至少70％、更优选地至少75％、更优选地至少80％、更优选地至少85％、更优选地至少90％、更优选地至少92％、更优选地至少95％、更优选地至少97％、以及甚至更优选地至少99％相同性。优选地，SEQ ID NO4的前体是SEQ ID NO1或SEQ ID NO2，SEQID NO5的前体是SEQ ID NO3，SEQ ID NO48的前体是SEQ ID NO47，SEQ ID NO53的前体是SEQ ID NO52。优选地，可以从昆虫中纯化出所述肽。更优选地，可以从鳞翅昆虫中纯化出所述肽。更优选地，可以从螟蛾科(Pyralidae)的鳞翅昆虫中纯化出所述肽。更优选地，可以从蜡螟(Galleria sp.)中纯化出所述肽。甚至更优选地，可以从大蜡螟(Galleria mellonella)中纯化出所述肽。在特别优选的实施方式中，可以从已经被暴露于真菌或细菌感染的昆虫中纯化出所述肽。对于鳞翅昆虫而言，优选地可以从已经暴露于细菌(例如但不限于大肠杆菌(Escherichia coli)和/或藤黄微球菌(Micrococcus luteus))的末龄幼虫中纯化出所述肽。在另一个实施方式中，优选地，肽具有约4.5kDa到约3.3kDa之间的分子量。更优选地，肽具有约4.3kDa、约4.0kDa、或约3.6kDa的分子量。仍在更优选的实施方式中，肽包括N末端的包括螺旋结构的两亲性区域(至少相对于C末端)、C末端的也包括螺旋结构和酸性残基的疏水性区域(至少相对于N末端)、和带电荷的C末端的尾部。在更优选的实施方式中，肽包括氨基酸序列Xaa1Lys Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Ala Ile Lys Lys Gly Gly Xaa6Xaa7IleXaa8Lys Xaa9Xaa10Xaa11Xaa12Xaa13Xaa14Xaa15Ala Xaa16Thr Ala HisXaa17Xaa18Xaa19Xaa20Xaa21Xaa22Xaa23Xaa24Xaa25Xaa26Xaa27Xaa28Xaa29Xaa30(SEQ ID NO62)。优选地，Xaa1是Gly、Pro、Ala或缺失，更优选地是Gly或缺失；优选地，Xaa2是Ile、Val、Ala、Leu、Met或Phe，更优选地是Ile或Val；优选地，Xaa3是Pro，Gly，Asn，Gln or His，更优选地是Pro或Asn；优选地，Xaa4是Ile、Val、Ala、Leu、Met或Phe，更优选地是Ile或Val；优选地，Xaa5是Lys、Arg、Gly、Pro、Ala、Asn、Gln或His，更优选地是Lys、Gly或Asn；优选地，Xaa6是Gln、Asn、His、Lys或Arg，优选地是Gln或Lys；优选地，Xaa7是Ile、Val、Ala、Leu或Gly、更优选地是Ile或Ala；优选地，Xaa8是Gly、Pro、Ala、Lys或Arg，更优选地是Gly或Lys；优选地，Xaa9是Val、Leu、Ile、Gly、Pro或Ala，更优选地是Ala或Gly；优选地，Xaa10是Ile、Val、Met、Ala、Phe或Leu，更优选地是Leu或Phe；优选地，Xaa11是Arg、Lys、Gly、Pro或Ala，更优选地是Arg、Gly或Lys；优选地，Xaa12是Gly、Pro、Ala、Val、Ile、Leu、Met、或Phe，更优选地是Gly或Val；优选地，Xaa13是Ile、Leu、Val、Ala、Met或Phe，更优选地是Val、Ile或Leu；优选地，Xaa14是Asn、Gln、His、Gly、Pro、Ala、Ser或Thr，更优选地是Asn、Gly或Ser；优选地，Xaa15是Ile、Val、Ala本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基本上纯化的肽，其包括选自以下一组的序列：　　　　ｉ）ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４所示的氨基酸序列；　　　　ｉｉ）与ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４具有至少６０％相同性的氨基酸序列；　　　　ｉｉｉ）ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：５所示的氨基酸序列；　　　　ｉｖ）与ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：５具有至少８０％相同性的氨基酸序列；　　　　ｖ）ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４８所示的氨基酸序列；　　　　ｖｉ）与ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４８具有至少７０％相同性的氨基酸序列；　　　　ｖｉｉ）ＳＥＱ　　　ＩＤ　　ＮＯ：５３所示的氨基酸序列；　　　　ｖｉｉｉ）与ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：５３具有至少７０％相同性的氨基酸序列；　　　　ｉｘ）ｉ）到ｖｉｉｉ）中任一项的生物学活性片段；和　　　　ｘ）包括ｉ）到ｉｘ）中任一项的氨基酸序列的前体，　　　　其中所述肽或其片段表现出抗真菌的和／或抗细菌的活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：彼得戴维伊斯特，苏珊伊丽莎白布朗，
申请(专利权)人：联邦科学技术研究组织，粮食研究发展公司，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]