化学胁迫法分离纯化勤奋金属球菌制造技术

一种分离勤奋金属球菌（Ｍｅｔａｌｌｏｓｐｈａｅｒａ　　ｓｅｄｕｌａ）的方法。将待分离样品在含有化学胁迫剂的培养基Ａ中，于７５℃下连续震荡富集二次，得到富集物Ｂ，再在７０℃下连续震荡富集三次，得到富集物Ｅ，然后在相同条件下连续进行四次震荡稀释分离，最后得到稀释物即纯化的Ｍ．ｓｅｄｙｌａ菌株。本发明专利技术选用勤奋金属球菌具有较高抗性，而对其它细菌和真菌都具有较高毒性的化学胁迫剂，在富集和纯化过程中造成强大的化学胁迫效应，对勤奋金属球菌进行定向富集和纯化，突破了一般稀释法难以分离勤奋金属球菌的难点。该方法主要适用于金属球菌属（Ｍｅｔａｌｌｏｓｐｈａｅｒａ）古生菌的分离纯化。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种分离勤奋金属球菌的方法，其特征在于：该方法首先按１０％的接种量将样品加到培养基Ａ中，加入０．５μＭ尼日利亚菌素，在７５℃下震荡培养１２０～１６８小时，在相同温度下密闭静置４８小时，得富集物Ａ；按１０％的接种量将富集物Ａ转接入新鲜的培养基Ａ中，并向该培养基中加入１．０μＭ尼日利亚菌素，在相同温度下震荡培养１２０小时，得到富集物Ｂ；将富集物Ｂ仍按１０％接种量接入含有１．０μＭ尼日利亚菌素和５．０μＭ２，４－二硝基苯酚的培养基Ａ中，在７０℃下震荡培养９６小时，停止震荡，静置２４小时，此为富集物Ｃ；按１０％接种量将富集物Ｃ接入新鲜培养基Ａ，其中含１．５μＭ尼日利亚菌素和１０．０μＭ２，４－二硝基苯酚，继续在７０℃下震荡培养９６小时，得到富集物Ｄ；按１０％的接种量将富集物Ｄ接入培养基Ｂ中，加入１．５μＭ尼日利亚菌素和１５．０μＭ２，４－二硝基苯酚，７０℃震荡培养９６小时，按相同接种量，更换同样的新鲜培养基，继续培养７２小时，得到富集物Ｅ，此为最终富集物；将富集物Ｅ按１０↑［－８］、１０↑［－９］、１０↑［－１０］稀释度，分别接入培养基Ｂ中，在７０℃下进行震荡稀释分离，用重铬酸钾法滴定亚铁含量，直接计数法计数活细胞数，当亚铁氧化率达９０％以上，菌数达５×１０↑［７］／ｍｌ时，停止培养，选择稀释倍数最高的培养物作为稀释物；如此反复再稀释分离三次，最后得到的稀释物即纯化的Ｍ．ｓｅｄｕｌａ菌株；所述培养基Ａ为：（ＮＨ↓［４］）↓［２］ＳＯ↓［４］１．０ｇ／ｌ，ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ０．２５ｇ／ｌ，ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］０．２５ｇ／ｌ，酵母提取物０．０１％（ｗ／ｖ），ＦｅＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ２ｍＭ，ｐＨ２ ．０；所述培养基Ｂ为：（ＮＨ↓［４］）↓［２］ＳＯ↓［４］３．０ｇ／ｌ，ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ０．５ｇ／ｌ，Ｋ↓［２］ＨＰＯ↓［４］.３Ｈ↓［２］Ｏ０．５ｇ／ｌ，ＫＣｌ０．１ｇ／ｌ，Ｃａ（ＮＯ↓［３］）↓［２］０．０１ｇ／ ｌ，酵母提取物０．０２％（ｗ／ｖ），ＦｅＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ１０ｍＭ，ｐＨ１．６。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邱冠周，丁建南，高健，吴学玲，康健，张成桂，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：43[中国|湖南]