羊草耐盐体细胞突变体筛选方法技术

本发明专利技术涉及一种羊草耐盐体细胞突变体筛选方法，属于羊草基因工程和遗传育种领域。包括成熟胚诱导愈伤组织再生，体细胞突变体筛选体系的建立，获得耐盐试管苗。优点在于以羊草成熟种子为外植体，筛选的培养基能够高效诱导羊草成熟胚形成愈伤组织并且能够高效再生；该方法操作简便，效果好，适应性广，利用该方法改良羊草品种具有时间短、效率高等特点，培育一个抗盐碱新品种比常规育种方法能提前３～４年完成。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种羊草耐盐体细胞突变体筛选方法，包括下列步骤：一、成熟胚诱导愈伤组织再生：ａ．种子的处理：取充分成熟、结构完整的供试羊草种子，剥去种皮，用赤霉素５０－１５０ｐｐｍＧＡ↓［３］处理４８小时破除休眠，再用７０％乙醇和０．１％升汞消毒处理；ｂ．愈伤组织的诱导和继代：诱导培养基用ＭＳ培养基，激素为２，４－Ｄ，浓度为２～４ｍｇ／Ｌ，将消毒处理后的植物种子接种到诱导培养基上，培养７～１５天，获得愈伤组织；将愈伤组织接种到继代培养基上培养，１０～２０天继代一次，继代３－５次，该继代培养基采用ＭＳ培养基，激素为２，４－Ｄ，浓度为２ｍｇ／Ｌ；ｃ．愈伤组织的再生：将继代生长良好的愈伤组织接种到分化培养基上，分化培养基：ＭＳ＋６－ＢＡ，浓度为１．０～２．０ｍｇ／Ｌ；激素为２，４－Ｄ，浓度为１．０ｍｇ／Ｌ；培养温度为２６±２℃，每天光照１４ｈ，光照强度２０００ｌｘ；将分化出的丛生芽接种到生根培养基上，培养２０～４０天，该生根培养基为：１／４ＭＳ＋ＮＡＡ，１．０～２．０ｍｇ／Ｌ；二、体细胞突变体筛选体系的建立配置１Ｍ的中性盐溶液，含１ＭＮａＣｌ，与ＭＳ培养基分别以１２１℃，２０分钟高温灭菌后，按以下比例混合配制含盐培养基；第一次：设９个盐浓度梯度为：含盐量（ｍｍｏｌ／Ｌ）ＭＳ０５０１００１５０２００２５０３００３５０４００第二次：设８个盐浓度梯度为：含盐量（ｍｍｏｌ／Ｌ）ＭＳ０８０１００１２０１４０１６０１８０２００用已经继代培养３～５代、生长旺盛、状态良好且具有胚性的植物愈伤组织进行耐盐性筛选；首先确定羊草愈伤组织耐盐临界浓度，该临界浓度为在该浓度中，植物愈伤组织成活率为１％～５％，取在ＭＳ培养基中继代培养生长状态良好的胚性愈伤组织，分别接种于以上不同盐浓度的含盐培养基中；在２６℃温室中进行暗培养，分别于第８天，第１６天观察羊草愈伤组织生长情况，按羊草愈伤组织耐盐临界浓度确定的植物愈伤组织成活率为１％～５％，得出：羊草愈伤组织耐盐临界浓度采用１８０ｍｍｏｌ／Ｌ，在含盐培养基上，直接从该高于临界浓度的培养基中筛选成活的羊草愈伤组织，相同方法，逐代筛选，共筛选３－４代成活植物愈伤组织；三、获得耐盐试管苗：将筛选出的３－４代成活植物愈伤组织接种到分化培养基、生根培养基上，获得耐盐试管苗，产生种子获得耐盐品种；其中分化培养基为：ＭＳ＋６－ＢＡ，浓度为１．０～２．０ｍｇ／Ｌ；激素为２，４－Ｄ，浓度为１．０ｍｇ／Ｌ；分化培养温度为２６±２℃，每...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王丕武，曲同宝，关淑艳，曲静，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]