本发明专利技术提供了一种与ＨＬＡ－Ａ型分子结合的ＨＬＡ－结合肽，所述ＨＬＡ－结合肽包括至少一种类型选自ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１至６０的氨基酸序列，并且不少于８个且不超过１１个氨基酸残基。由预测程序，利用图１所示的主动学习实验方法预测，所有的氨基酸序列都具有与人ＨＬＡ－Ａ２４分子或人ＨＬＡ－Ａ２分子结合的性质。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及HLA结合肽，以及编码该HLA结合肽的DNA片段和重组载体。
技术介绍
对癌细胞具有特异性的癌症抗原呈递在癌细胞表面上时，当癌细胞被识别为自体外来物质，结果进行天然免疫反应，并且随后诱发特异性免疫反应时，是有机会因此引起消灭癌细胞的反应。诱发特异性免疫反应时，体液中癌细胞衍生的片段等被中和抗体消灭，癌细胞本身被细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)所消灭。即，CTL特异性识别存在于癌细胞表面上HLA I类分子中的、由8-11个氨基酸组成的癌症抗原(CTL表位)，并通过破坏癌细胞消灭癌。因此，为了开发癌症的治疗用疫苗，鉴定这样的癌症特异性CTL表位是很关键的。这种技术从专利公开1中已知。专利公开1陈述了由特异性氨基酸序列形成的寡肽具有与HLA结合的性质。日本专利申请公开No.H8-151396(1996)
技术实现思路
但是，上述公开中记述的传统技术考虑到以下几点有改进的空间。首先，尚不清楚上述公开的HLA结合肽是否与HLA分子有效结合，根据HLA-结合的性质，仍有改进的空间。其次，已证明上述公开的HLA-结合肽具有与HLA-DQ4结合的性质。但是，尚不清楚其是否与常见于欧美人中的HLA-A2分子(HLA-A*0201基因等的产物)，以及常见于日本人中的HLA-A24分子(HLA-A*2402等的产物)相结合。本专利技术在上述情况下完成，其目的是提供表现出与特异型HLA分子高亲和力结合的HLA-结合肽。根据本专利技术，提供了与HLA-A型分子结合的HLA-结合肽，该HLA-结合肽含有至少一种类型的选自SEQ ID NOS1至60的氨基酸序列，并由不少于8个并且不超过11个氨基酸残基组成。此外，根据本专利技术，提供了HLA-结合肽，包含至少一种类型的选自SEQ ID NOSI、2、3、4、5、6、7、10、14、29、30、31、33、38、39、40、43、44、49和51的氨基酸序列。此外，根据本专利技术，提供了与HLA-A型分子结合的HLA-结合肽，该HLA-结合肽含有通过对包含在上述HLA-结合肽中的氨基酸序列的一或两个氨基酸残基进行缺失、置换或添加而形成的氨基酸序列，并由不少于8个且不超过11个氨基酸残基组成。以这种方法，含有通过对具有与HLA-A型分子结合性质的特异性氨基酸序列进行一个或几个氨基酸残基进行缺失、置换或添加而形成的氨基酸序列的构建体，也能表现与上述HLA-结合肽相似的作用。另外，根据本专利技术，提供了含有编码上述HLA-结合肽的DNA序列的DNA片段。另外，根据本专利技术，提供了含有编码上述HLA-结合肽的DNA序列的重组载体。另外，根据本专利技术，提供了在哺乳动物体内转变为上述HLA-结合肽的HLA-结合肽前体。上文说明了本专利技术的构建体，但是这些构建体的任何组合作为本专利技术的实施方案也有效。此外，将本专利技术的表达方式转化为另一种类别(category)作为本专利技术的实施方案也有效。根据本专利技术，由于其包括特异性氨基酸序列，可以得到与HLA-A型分子具有优异的结合性质的HLA-结合肽。附图说明上述目的、其它目的、特征和优势根据下文说明的优选实施方案参考附图将变得更为显见。说明用于实施方案中的主动学习实验设计的示意图。实施专利技术的最佳方式实施本专利技术的方式在下文通过参考附图说明。在所有的附图中，同样的构件用同样的参考数字和符号表示，从而不用重复解释。实施方案1在本实施方案中，一种含有与HLA分子结合的氨基酸序列的肽，通过用主动学习实验方法(日本专利申请公开No.H11-316754(1999))得到的假设预测，-log Kd值是3或更高，由不少于8并且不超过11个氨基酸残基组成，用来作为HLA-结合肽的候选物。结合试验的结果证实这些肽实际上是HLA-结合肽。结果，可以有效得到大量具有与HLA-A型分子结合的优异性质的HLA-结合肽，由于它们含有的氨基酸序列与HLA分子结合的-logKd值为3或更高。具体而言，与本实施方案有关的HLA-结合肽是与HLA-A型分子结合的HLA-结合肽，含有至少一种类型选自将在下文中描述的SEQ ID NOS1至60的氨基酸序列，并由不少于8并不超过11个氨基酸残基组成。在人HLA-A型中，大约50％的日本人具有HLA-A24型。很多欧美人如德国人具有HLA-A2型。本文提到的所有这些序列是由包含在癌症抗原WT1的某个基因组蛋白中的9个氨基酸残基组成的序列。SEQ ID NOS1至30的序列在下面的表1中给出表1HLA-A24-结合肽 SEQ ID NOS1至30的序列是由包含在癌症抗原WT1的某个基因组蛋白中的9个氨基酸残基组成。SEQ ID NOS1至30的序列是由上述方法预测具有与HLA-A24分子优异结合的序列。SEQ ID NOS1至30按照结合等级降低排列。即，SEQ ID NO1是据预测具有最佳结合的序列。预测的与HLA-A24分子的结合分值和每个序列的结合实验数据以-log Kd值的形式表达。SEQ ID NOS31至60的序列在下面的表2中给出。表2HLA-A2-结合肽 SEQ ID NOS31至60的序列是由包含在癌症抗原WT1的某个基因组蛋白中的9个氨基酸残基组成的序列。SEQ ID NOS31至60的序列是由上述方法预测具有与HLA-A24分子优良结合的序列。SEQ ID NOS31至60按照结合等级降低排列。即，SEQ ID NO31是据预测具有最佳结合的序列。预测的与HLA-A2分子结合的记分和每个序列的结合实验数据以-log Kd值的形式表示。虽然详细资料在后文描述，但是很清楚在预测记分和结合实验数据之间有相关性。即，虽然有轻微误差，但是可以说上述方法预测的与HLA-A分子高度结合的肽在实验中发现与HLA-A分子有高水平结合。由于没有传统技术通过利用所述实验设计方法发现HLA-结合肽，所以只有很少量的HLA-结合肽被实验证实具有HLA-结合特性。为此，甚至在通过传统方法随机合成9个氨基酸残基组成的肽，并进行实验以发现其是否与HLA分子结合时，仅仅有约1/100的概率发现一个-log Kd值超过6的结合。根据本实施方案，由于采用了如上所述的利用实验设计方法发现HLA-结合肽的技术，发现了多达60个HLA-结合肽的序列。此外，当某些得到的HLA-结合肽的结合性得到实验检测时，证实了经受实验的所有序列都显示了与HLA的极好结合，等于或高于预测的水平。这些序列中，含有至少一种类型选自SEQ ID NOS1、2、3、4、5、6、7、10、14、29、30、31、33、38、39、40、43、44、49和51的氨基酸序列的HLA-结合肽，被实验证实与人HLA-A型分子结合。因此可以肯定地说，它是在与人HLA-A型分子结合方面具有优良特性的HLA-结合肽。本实施方案相关的与HLA-结合肽的HLA分子的结合的-log Kd值为3或更高，尤其优选5或更高，更优选5.4或更高。在生化领域，已知结合能力，根据-log Kd值约为3是肽实际上是否与MHC结合的阈值水平。因此，如果与HLA分子的结合根据-log Kd值为3或更高，就可以说其为HLA-结合肽。此外，如果与HLA分子的结合根据-log Kd值为5或更高，由于所得的肽在与HLA分子结合上具本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种与ＨＬＡ－Ａ型分子结合的ＨＬＡ－结合肽，所述ＨＬＡ－结合肽包括： 至少一种类型选自ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１至６０的氨基酸序列，并且 不少于８个且不超过１１个氨基酸残基。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：宫川知也，宇高惠子，
申请(专利权)人：日本电气株式会社，国立大学法人高知大学，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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