抗重金属铅单克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术是重金属铅单克隆抗体的制备方法，属于生物技术领域。专用于特异性识别重金属铅的单克隆抗体的制备。重金属铅离子与载体蛋白通过双功能金属螯合剂对氨基苯基－二乙三胺五乙酸偶联获得完全抗原，经免疫Ｂａｌｂ／Ｃ鼠，脾细胞和Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞通过杂交瘤技术制备杂交瘤细胞，经筛选获得了稳定的分泌特异性强的抗铅单克隆抗体，该抗体只针对Ｐｂ－ＤＴＰＡ有抑制，而不与ＤＴＰＡ起反应。本发明专利技术抗原实用性强，抗原和抗体稳定性好。抗原制备技术简便可行：抗原的整个制备过程无需要特别的仪器设备，容易工厂化规模生产。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
铅单克隆抗体的制备方法，包括：１）抗原制备：称取血蓝蛋白１５ｍｇ溶于２ｍｌ１０ｍＭ，ｐＨ７．４Ｎ－２－羟乙基哌嗪－Ｎ－２－乙磺酸缓冲液中形成７．５ｍｇ／ｍｌ血蓝蛋白溶液；称取双功能金属螯合剂对氨基苯基－二乙三胺五 乙酸８ｍｇ溶于０．８ｍｌ超纯水形成金属螯合剂溶液；将０．８ｍｌ金属螯合剂溶液搅拌下逐滴滴加到２ｍｌ７．５ｍｇ／ｍｌ血蓝蛋白溶液中，随后滴加０．２ｍｌ２０ｍＭ戊二醛室温下搅拌２４ｈｒ；反应产物用３０Ｋｄ的超滤管纯化，超 滤管预先用１００ｍＭ乙二胺四乙酸浸泡，用超纯水充分冲洗后，超滤管内加入反应产物超滤，超滤管内用１０ｍＭ，ｐＨ７．４Ｎ－２－羟乙基哌嗪－Ｎ－２－乙磺酸缓冲液５次除去其中未反应的小分子金属螯合剂，所得产物即为纯化的血蓝蛋白－对氨基苯基－二乙三胺五乙酸；３０ｍｇ牛血清白蛋白溶于６ｍｌｐＨ为７．４、１０ｍＭ的Ｎ－２－羟乙基哌嗪－Ｎ－２－乙磺酸缓冲液，称取１８ｍｇ对氨基苯－二乙三胺五乙酸溶于１．８ｍｌ超纯水中，取６ｍｌ含量为５ｍｇ／ｍｌ的牛血清白蛋白逐滴滴加到１．８ ｍｌ的对氨基苯－二乙三胺五乙酸溶液中，同时加入５ｍｌ浓度为２０ｍＭ的戊二醛溶液，室温下搅拌２４ｈｒ；反应产物用上述３０Ｋｄ的超滤管方法进行纯化除去其中未反应的小分子金属螯合剂，所得产物即为纯化的牛血清白蛋白－对氨基苯基－二乙三胺五乙 酸溶液，将牛血清白蛋白－对氨基苯基－二乙三胺五乙酸溶液等分成两份，一份直接用作包被抗原，一份用于下面的反应；称取４３．８ｍｇ含量为９９．９９９％的铅颗粒溶于１ｍｌ优级６Ｍ硝酸中，形成２１２．６ｍＭ硝酸铅溶液；取９９μｌ硝酸铅 溶液搅拌下分别逐滴滴加到纯化过的血蓝蛋白－对氨基苯基－二乙三胺五乙酸和牛血清白蛋白－对氨基苯基－二乙三胺五乙酸中，用０．５Ｍ盐酸调节ｐＨ至７．０，室温下反应３小时；反应产物用上述３０Ｋｄ的超滤管方法进行纯化去除未反应的金属离子，纯化 后的产物分别为血蓝蛋白－对氨基苯基－二乙三胺五乙酸－Ｐｂ和牛血清白蛋白－对氨基苯基－二乙三胺五乙酸－Ｐｂ以所含蛋白进行计量为１５ｍｇ铅的人工抗原含量的溶液，以血蓝蛋白－对氨基苯基－二乙三胺五乙酸－Ｐｂ作免疫原，以牛血清白蛋白－对氨基苯基－二乙三胺五乙酸－Ｐｂ作为包被抗原；２）小鼠免疫：将制备好的血蓝蛋白－对氨基苯基－二乙三胺五乙酸－Ｐｂ作为免疫原免疫６－８周龄雌性...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘凤权，朱晓霞，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]