一种Myostatin特异性抗体的治疗性疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ特异性抗体的治疗性疫苗及其的制备方法，利用人工合成ＤＮＡ的方法获得了在Ｎ－端连接了Ｔｈ细胞辅助表位ＴＴ↓［８３０－８４４］人ｍｙｏｓｔａｔｉｎ　　Ｃ－末端区基因片段，其基因序列为ＴＴ－Ｍｓ，将合成的ＴＴ－Ｍｓ基因片段克隆至ｐＱＥ３０原核表达载体，构建了ｐＱＥ－ＴＴ－Ｍｓ重组表达载体，利用ＰＣＲ扩增Ｍｓ基因片段，构建了ｐＱＥ－Ｍｓ重组表达载体；在大肠杆菌中表达了融合蛋白Ｈｉｓ－ＴＴ－Ｍｓ和Ｈｉｓ－Ｍｓ，对蛋白进行鉴定后作为ｍｙｏｓｔａｔｉｎ的蛋白疫苗；将合成的ＴＴ－Ｍｓ基因片段克隆至ｐＶＡＣ１－ｃｍｓ基因疫苗专用质粒，构建了ｐＶＡＣ－ＴＴ－Ｍｓ重组质粒，体外进行了目的蛋白表达的鉴定，作为ｍｙｏｓｔａｔｉｎ基因疫苗。本发明专利技术的方法所构建的Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ蛋白疫苗和基因疫苗，免疫健康成年ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，可诱导出针对人ｍｙｏｓｔａｔｉｎ分子的特异性抗体，免疫小鼠骨骼肌质量和力量明显提高。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ特异性抗体的治疗性疫苗，其特征在于，将合成的ＴＴ－Ｍｓ基因片段克隆至ｐＱＥ３０原核表达载体，构建ｐＱＥ－ＴＴ－Ｍｓ重组表达载体，利用ＰＣＲ扩增Ｍｓ基因片段，构建ｐＱＥ－Ｍｓ重组表达载体；在大肠杆菌中表达融合蛋白Ｈｉｓ－ＴＴ－Ｍｓ和Ｈｉｓ－Ｍｓ，对蛋白进行鉴定后作为ｍｙｏｓｔａｔｉｎ的蛋白疫苗；或将合成的ＴＴ－Ｍｓ基因片段克隆至ｐＶＡＣ１－ｃｍｓ基因疫苗专用质粒，构建ｐＶＡＣ－ＴＴ－Ｍｓ重组质粒，体外进行目的蛋白表达的鉴定，作为ｍｙｏｓｔａｔｉｎ基 因疫苗；所述的ＴＴ－Ｍｓ基因片段对应的氨基酸序列具体如下：ＧｌｙＳｅｒＧｌｎＴｙｒＩｌｅＬｙｓＡｌａＡｓｎＳｅｒＬｙｓＰｈｅＩｌｅＧｌｙＩｌｅＴｈｒＧｌｕ１ ５１０１５ＡｌａＡｌａＡｌａＧｌｕＰｈｅＡｓｐＰｈｅＧｌｙＬｅｕＡｓｐＣｙｓＡｓｐＧｌｕＨｉｓＳｅｒＴｈｒ２０２５３０ＧｌｕＳｅｒ　 　ＡｒｇＣｙｓＣｙｓＡｒｇＴｙｒＰｒｏＬｅｕＴｈｒＶａｌＡｓｐＰｈｅＧｌｕＡｌａＰｈｅ３５４０４５ＧｌｙＴｒｐＡｓｐＴｒｐＩｌｅＩｌｅＡｌａ ＰｒｏＬｙｓＡｒｇＴｙｒＬｙｓＡｌａＡｓｎＴｙｒＣｙｓ５０５５６０ＳｅｒＧｌｙＧｌｕＣｙｓＧｌｕＰｈｅＶａｌＰｈｅＬｅｕＧｌｎＬｙｓＴｙ ｒＰｒｏＨｉｓＴｈｒＨｉｓ６５７０７５８０ＬｅｕＶａｌＨｉｓＧｌｎＡｌａＡｓｎＰｒｏＡｒｇＧｌｙＳｅｒＡｌａＧｌｙＰｒｏＣｙｓＣｙｓＴｈ ｒ８５９０９５ＰｒｏＴｈｒＬｙｓＭｅｔＳｅｒＰｒｏＩｌｅＡｓｎＭｅｔＬｅｕＴｙｒＰｈｅＡｓｎＧｌｙＬｙｓＧｌｕ１００１０５１１０Ｇｌ ｎＩｌｅＩｌｅＴｙｒＧｌｙＬｙｓＩｌｅＰｒｏＡｌａＭｅｔＶａｌＶａｌＡｓｐＡｒｇＣｙｓＧｌｙＣｙｓ１１５１２０１２５Ｓｅｒ＊＊...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张英起，唐量，韩苇，李萌，薛晓畅，孟洁如，包春杰，郝强，李维娜，王增禄，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]