酪蛋白激酶2反义疗法制造技术

本发明专利技术提供了与酪蛋白激酶２核酸序列杂交的反义寡核苷酸，以及使用该反义寡核苷酸抑制酪蛋白激酶２的表达以及减小实体瘤的尺寸的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及癌症疗法，更具体地说，涉及使用酪蛋白激酶2反义分子的癌症疗法。
技术介绍
酪蛋白激酶2(CK2)是普遍存在的蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶，它与细胞的多种功能有关，包括调节细胞生长和增殖以及凋亡(参见，例如Tawfic等人，2001，Histol.Histopathol.，16573-82)。CK2是高度保守的酶，而且被认为对细胞存活至关重要。该激酶是由复合了两个β亚基的两个催化亚基(α和/或α’)构成的异四聚物。CK2调节细胞生长的一种方式是通过在核中信号传递，在核中，核基质和染色质看上去上是其优先的目标。因为CK2在各种肿瘤中的水平升高，它与肿瘤过程密切相关。包括CK2的转基因表达在内的研究已经提供证据表明CK2-α的适度过表达赋予细胞致癌可能，并进一步表明，在第二致癌信号存在下，极大地增加了瘤形成的发生率。
技术实现思路
本专利技术提供了与酪蛋白激酶2核酸序列杂交的反义寡核苷酸，以及使用该反义寡核苷酸抑制CK2的表达，并减小实体瘤尺寸的方法。本申请公开的内容报道了通过不同路径输送到前列腺或膀胱肿瘤异种移植物的CK2α反义物的作用。使用注射入鼠的皮下组织中的PC3-LN4细胞来产生裸鼠中的前列腺癌异种移植物。CK2α反义寡核苷酸的肿瘤内注射导致前列腺癌肿瘤以依赖于剂量和时间的方式在体内根除。用CK2α反义寡核苷酸治疗肿瘤的分析证实了CK2信息和与核相关的活性的下调。在类似的实验条件下，正常的细胞和组织较为耐CK2α反义寡核苷酸的影响，证据为细胞死亡最少。对具有同位前列腺肿瘤的裸鼠静脉传递裸露的CK2α硫代磷酸酯寡核苷酸也可有效下调CK2，诱导肿瘤中凋亡。也可以利用包囊在小于50nm的肌腱蛋白毫微囊剂中的呈磷酸二酯形式的CK2α反义寡核苷酸。当通过静脉内路径输送时，发现这些毫微囊剂化制剂比裸露的反义寡核苷酸明显更有效。一方面，本专利技术提供了一种抑制实体瘤中的酪蛋白激酶2的表达的方法。该方法包括传递反义寡核苷酸至肿瘤，其中，该反义寡核苷酸与酪蛋白激酶2核酸序列杂交，并降低了其表达。另一方面，本专利技术提供了一种减小个体中的实体瘤尺寸的方法。该方法包括传递反义寡核苷酸至肿瘤，其中，该反义寡核苷酸与酪蛋白激酶2核酸序列杂交，并降低了其表达。通常，酪蛋白激酶2表达的降低导致肿瘤尺寸的减小。传递酪蛋白激酶2反义寡核苷酸的方法可包括，例如肿瘤内的或静脉内的。此外，可将反义寡核苷酸包囊。在本专利技术的一个实施方式中，反义寡核苷酸是硫代磷酸酯反义寡核苷酸。有代表性的反义寡核苷酸具有示于SEQ IDNO1或SEQ ID NO2的序列。在本专利技术的另一个实施方式中，酪蛋白激酶2是酪蛋白激酶2-α或酪蛋白激酶2-β。可用本专利技术方法治疗的有代表性的实体瘤包括源自诸如前列腺、膀胱、乳腺、肝脏、肾脏、脑、头部或颈部等部位的那些。再一方面，本专利技术提供了一种组合物，它包括反义寡核苷酸及其药学上可接受的载体，其中，该反义寡核苷酸与酪蛋白激酶2核酸序列杂交，并降低了其表达。该组合物可以包囊的形式提供。在一个实施方式中，该组合物可包括具有示于SEQ ID NO1或SEQ ID NO2的序列的反义寡核苷酸。除非另有限定，本文中使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所属领域的普通技术人员普遍所知的含义。虽然与本文中描述的那些类似或等同的方法和材料可用于本专利技术的实践或试验中，但是下文中描述了合适的方法和材料。另外，这些材料、方法和例子仅仅是说明性的，不起限制作用。本文中提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献作为整体引用作为参考。在有冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。本专利技术的一个或多个实施方式的细节将参照附图在下文中描述。本专利技术的其它特征、目的和优点将从附图具体实施方式、以及权利要求书中看出。附图说明图1示出了在肿瘤内施用了CK2反义寡核苷酸之后无胸腺的裸鼠中的前列腺肿瘤尺寸。肿瘤尺寸每2天评估。各个点代表3个肿瘤。图2示出了多特异性的反义序列的作用。序列(示于表5)体外施用于肿瘤细胞，并使用胸苷掺入来评估生长率。使用96-孔板一式两份实验，，重复1-2次。图3示出了用反义序列治疗后的肿瘤生长。用测径仪跟踪测定肿瘤直径，并使用公式V＝0.5(L*W*W)估算体积，式中L等于两个肿瘤测定值中长的那个。在各个附图中相同的附图标记表示相同的元素。具体实施例方式本专利技术使用反义化合物，具体的是寡核苷酸，用以抑制目标核酸分子的表达。本文中使用的术语“目标核酸”是指RNA和DNA，包括cDNA、基因组DNA和合成(例如，化学合成的)DNA。该目标核酸可以是双链的或单链的(即，有义或反义单链)。在一些实施方式中，目标核酸编码酪蛋白激酶2(CK2)多肽。因此，“目标核酸”包括编码CK2的DNA、由该DNA转录的RNA(包括前-mRNA和mRNA)、以及得自该RNA的cDNA。“反义”化合物是含有核酸或核酸类似物的化合物，它可以1)特异地与目标核酸杂交以影响目标核酸的功能、调控或加工；2)特异地结合蛋白质以干扰目标蛋白质的功能；或者3)模拟病原体感染从而引起对作为目标的核酸种类的细胞加工。用反义寡核苷酸抑制目标核酸或蛋白质的表达通常称为反义技术。因此，反义分子包括siRNA、antagomir、适体、以及与mRNA或其它目标RNA、DNA或蛋白质互补的序列。本文中使用的术语“杂交”是指氢键合，可以是互补的核苷或核苷酸碱基之间的Watson-Crick、Hoogsteen、或者反Hoogsteen氢键合。例如，腺嘌呤和胸腺嘧啶，以及鸟嘌呤和胞嘧啶分别是互补的核碱基(在本领域中通常简称为“碱基”)，它们通过形成氢键配对。本文中使用的“互补的”是指在两个核苷酸之间精确配对的能力。例如，如果在寡核苷酸的特定位置上的核苷酸能够与目标核酸分子上的核苷酸氢键键合，则认为该寡核苷酸和目标核酸在该位置是互补的。当各个分子上的足量的相应位置被能够相互氢键键合的核苷酸占据时，寡核苷酸和目标核酸是彼此互补的。因此，“可特异性杂交的”用来表示足够程度的互补或精确配对，使得在寡核苷酸与目标核酸之间产生稳定的、特异的结合。本领域中明白，反义寡核苷酸的序列不需要与和其可特异性杂交的目标核酸的序列100％互补。当(a)寡核苷酸与目标核酸的结合干扰目标核酸的正常功能时，以及(b)具有足够的互补性以避免在需要特异结合的条件下(即，进行体外测试的条件下，或者进行体内测试或治疗用途的生理学条件下)反义寡核苷酸与非目标序列的非特异性结合时，反义寡核苷酸是可特异性杂交的。体外的严格条件取决于温度、时间和盐浓度(参见，例如Sambrook等人的Molecular CloningA Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，NY(1989))。通常，高度至中等严格的条件用于体外特异杂交，使得基本上类似的核酸之间(并非不同的核酸之间)发生杂交。特异杂交条件是在40℃下，在5X SSC(0.75M氯化钠/0.075M柠檬酸钠)中杂交1小时，然后在40℃的1X SSC中洗涤10次，并在室温下的1X SSC中洗涤5次。体内杂交条件由细胞内条件(例如，生理学pH和细胞内离子条件)构成，该条件控制反义寡核苷酸与目标序列的杂交。体内条件可通过严格性较本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制实体瘤中的酪蛋白激酶２的表达的方法，它包括：对所述肿瘤传递反义寡核苷酸，其中，所述反义寡核苷酸与酪蛋白激酶２核酸序列杂交，并降低其表达。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：JW斯莱顿，K阿罕默德，GM恩格，A戴维斯，D斯洛珀，
申请(专利权)人：明尼苏达大学董事会，
类型：发明
国别省市：US[美国]